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非洲猪瘟（ASF）严重影响养猪业，其病毒（ASFV）的免疫调控机制不明。研究人员开展了 ASFV 的 pS183L 蛋白对 RLR 信号通路影响的研究。结果发现 pS183L 抑制 MDA5 寡聚化，干扰 IFN-β 信号通路。该研究为 ASF 防控提供新靶点，意义重大。
非洲猪瘟（ASF）自 1921 年在肯尼亚被发现以来，像一场可怕的瘟疫，在非洲、欧洲、亚洲等地不断蔓延。2018 年，高致死性的基因型 II ASFV 毒株在中国沈阳出现，随后几乎席卷了中国所有省份，给养猪业带来了沉重打击，造成了巨大的经济损失。之后，低毒力的基因型 II 毒株以及基因型 I 毒株陆续出现，甚至还发现了高致死的基因型 I 和 II 重组毒株，这使得 ASF 的防控形势愈发严峻。
非洲猪瘟病毒（ASFV）作为双链 DNA 病毒，其基因组庞大，编码 150 - 200 种病毒蛋白，这些蛋白参与病毒的复制、装配、免疫逃逸等过程。然而，近一半的病毒蛋白功能，尤其是免疫调节蛋白的功能仍不明确，这严重阻碍了有效疫苗和抗病毒药物的研发。
在机体对抗病毒感染的过程中，I 型干扰素（IFN-I）反应是重要的第一道防线，由模式识别受体（PRRs）识别病原体相关分子模式（PAMPs）触发。其中，视黄酸诱导基因 I（RIG-I）样受体（RLRs）在抗病毒感染中发挥着关键作用，但它在 DNA 病毒感染中的作用却知之甚少。尽管已有研究表明 ASFV 感染会激活 cGAS - STING 信号通路诱导 I 型干扰素反应，且 RIG-I 和 MDA5（黑色素瘤分化相关蛋白 5）的转录在 ASFV 感染早期会被激活，但具体的调控机制以及相关的 ASFV 蛋白仍不清楚。
为了深入探究这些问题，南京农业大学等机构的研究人员开展了相关研究。研究发现，一个此前未被鉴定的 ASFV 蛋白 pS183L，能够通过抑制 MDA5 寡聚化来负向调节 RLR 信号通路，进而干扰 MDA5 介导的 IFN-β 信号传导。这一发现为理解 ASFV 的免疫逃逸机制提供了新的视角，也为非洲猪瘟的防控提供了潜在的新靶点。该研究成果发表在《Veterinary Research》上。
研究人员主要运用了以下关键技术方法：首先是双荧光素酶报告基因实验，通过检测荧光素酶活性来分析相关蛋白对 IFN-β 启动子活性的影响；其次是共免疫沉淀实验，用于分析蛋白质之间的相互作用；此外，还运用了 RNA 提取和 RT - qPCR 技术，检测免疫相关基因的表达水平。
下面来看具体的研究结果：
- ASFV pS183L 减弱 MDA5 介导的 IFN-β 激活：研究人员利用双荧光素酶报告基因实验，对多个 ASFV 编码蛋白进行筛选，发现 pS183L 能够减弱 MDA5 介导的 IFN-β 启动子活性，而对 RIG-I 或 cGAS - STING 介导的 IFN-β 启动子活性没有影响，这表明 pS183L 可能抑制 MDA5 介导的 IFN-β 信号通路。
- ASFV pS183L 抑制 dsRNA 触发的 IFN-β 产生：研究人员用高分子量（HMW）和低分子量（LMW）的聚肌胞苷酸（poly (I:C)）分别激活 RIG-I 或 MDA5，然后通过 RT - qPCR 检测 IFN-β 的转录水平。结果显示，过表达 pS183L 会降低 IFN-β mRNA 水平，尤其是在 HMW poly (I:C) 处理时，同时炎症细胞因子 TNF-α 和干扰素刺激基因 ISG54 的 mRNA 水平也下降。这表明 pS183L 通过靶向 MDA5 介导的途径调节 RLR 信号。
- ASFV pS183L 抑制 MDA5 和 MAVS 之间的 RLR 信号传导：双荧光素酶报告基因实验表明，pS183L 能够减弱 MDA5 对 IFN-β 启动子的激活，而对 RIG-I、MAVS 或 TBK1 的激活没有影响。免疫印迹结果显示，过表达 pS183L 会减弱 poly (I:C) 刺激的 p - TBK1、p - IRF3 和 p - IκBα 的表达，且呈时间依赖性。这些结果表明 pS183L 在 MDA5 下游、MAVS 上游抑制 IFN-β 信号传导。
- ASFV pS183L 与 MDA5 相互作用：通过共免疫沉淀实验发现，pS183L 与 MDA5 存在相互作用，且在 ASFV 感染的肺泡巨噬细胞（PAMs）中也得到了验证。间接免疫荧光实验显示，pS183L 与 MDA5 在细胞质中共定位。进一步研究发现，pS183L 与 MDA5 的 CARD 结构域和螺旋酶结构域相互作用，这可能会破坏 MDA5 与 MAVS 的相互作用，从而抑制 IFN-β 的产生。
- pS183L 抑制 MDA5 寡聚化：共免疫沉淀和半变性去污剂琼脂糖凝胶电泳（SDD - AGE）实验表明，pS183L 能够破坏 MDA5 的寡聚化，随着 pS183L 表达量的增加，MDA5 寡聚化水平逐渐降低。这说明 pS183L 通过与 MDA5 相互作用，抑制 MDA5 寡聚化，进而阻断 MDA5 招募 MAVS，最终减弱 IFN-β 的产生。
研究结论和讨论部分指出，尽管 ASF 已被发现百年，但目前仍没有安全有效的疫苗。本研究首次发现 ASFV 的 pS183L 蛋白通过靶向 MDA5 负向调节先天免疫反应，这为深入理解 ASFV 的免疫逃逸机制提供了重要依据。同时，鉴于 pS183L 是首个被发现靶向 MDA5 下调 RLR 信号的 ASFV 蛋白，后续研究可围绕构建 S183L 缺失病毒，评估其在体内外病毒复制中的作用，有望为非洲猪瘟的防控开辟新的道路。
