告别稀释！NanoDrop Ultra让蛋白定量快准狠

引言

Thermo Scientific™ NanoDrop™ Ultra超微量紫外-可见分光光度计可快速、简便地完成蛋白质分析。其预置多种蛋白质检测程序，并采用微量样本基座技术，仅需 1.0–2.0 μL样本即可直接定量蛋白质，无需复杂稀释。牛血清白蛋白（BSA）的典型重复性标准偏差为±0.03 mg/mL（浓度范围0.03–10 mg/mL）；浓度高于10 mg/mL时，变异系数(%CV)为 ±2%。NanoDrop Ultra可在 0.03 mg/mL至820 mg/mL(BSA)的宽测量范围内实现精准、高重复性的蛋白质定量。

实验方法

1、仪器

NanoDrop Ultra通过与Thermo Scientific™ NanoDrop™ One（前一代超微量分光光度计）和Evolution™ One Plus（基于比色皿的传统分光光度计）进行对比验证。

2、样本制备

使用磷酸盐缓冲液（PBS）制备 0.75 mg/mL至15 mg/mL 的BSA稀释系列（样本1-4），以及邻苯二甲酸氢钾（KHP）制备 70 mg/mL至300 mg/mL 的模拟高浓度蛋白质稀释系列（样本5-7）。

3、检测条件

NanoDrop仪器：采用Protein A280程序，选择“BSA”样本类型（消光系数E1%设为6.7，符合朗伯比尔定律）。

Evolution One Plus仪器：固定波长280 nm检测，带宽1.0 nm，积分时间1.0秒。

所有样本均进行 10次重复测量（NanoDrop仪器）或 3次重复测量（Evolution One Plus仪器），计算平均值、标准偏差及%CV。

实验结果

表1. NanoDrop One与NanoDrop Ultra对比数据

图1. NanoDrop One与 NanoDrop Ultra 分光光度计之间的线性比较

表 1 列出了 BSA 和 KHP 稀释系列样品的平均值、标准偏差和变异系数（% CV），低浓度样本（1-3，≤10 mg/mL）的标准偏差均低于限值 0.03 mg/mL，最大偏差为0.016 mg/mL；高浓度样本（4-7，>10 mg/mL）的%CV均低于 2%，最大值为0.42%。仪器一致性验证显示，通过图1线性回归分析，NanoDrop Ultra与NanoDrop One的检测结果完全一致（R²=1.000），证明方法可靠。

表2. Evolution One Plus与NanoDrop Ultra低浓度样本对比数据

图2. Evolution One Plus 和 NanoDrop Ultra 分光光度计的线性比较。

分别在 NanoDrop Ultra与Evolution One Plus上测量0.03 mg/mL至1.5 mg/mL 低浓度BSA样品。每个样品的平均值和标准偏差列于表 2 中。NanoDrop Ultra 仪器的标准偏差最高为 0.02 mg/mL，符合性能要求。比较这两种仪器的线性曲线如图 2 所示。回归线的R²=1.000证实了Evolution One Plus和NanoDrop Ultra分光光度计检测的结果高度一致。

表3. NanoDrop Ultra 分光光度计每次重复测量的报告浓度

表3展示了 NanoDrop Ultra 分光光度计对 7 个样品各进行 10 次测量的数据。标准偏差在 0.01 - 1mg/mL 之间，其中低浓度样本（1-3，≤10 mg/mL）标准偏差仅 0.01mg/mL，变异系数（% CV）在 0.151 - 1.893 之间，高浓度样本（4-7，>10 mg/mL）的 % CV 均低于 2%。从数据来看，各浓度下测量值的标准偏差都较小，变异系数也在合理范围内，这表明多次测量的结果集中，离散程度低。由此可以得出结论，NanoDrop Ultra 分光光度计在测量样品时重复性很好。

结论

NanoDrop Ultra分光光度计在蛋白质浓度测定中展现出优异性能，其线性关系和检测重复性已通过实验验证。该仪器与常规分光光度计的对比测试显示，无论是在低浓度范围还是全量程范围内，测量结果均呈现高度一致性（R²=1.000），证实了数据的可靠性。值得注意的是，该设备通过预置应用程序显著提升了检测效率，其 0.03 mg/mL至820 mg/mL的BSA动态检测范围突破了传统比色皿法需要梯度稀释的技术限制，实现了样品直接测量。这种免稀释特性结合快速检测优势，使得NanoDrop Ultra能够无缝整合到蛋白质定量流程中，不仅节约了传统方法所需的稀释操作时间，更有效降低了试剂消耗和潜在误差风险，为实验室节省了宝贵的时间成本与科研资源。

写在最后

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