体内共聚焦显微镜下棘阿米巴角膜炎的诊断特征：开拓精准诊疗新视野

《Scientific Reports》：Diagnostic features of Acanthamoeba keratitis via in vivo confocal microscopy

棘阿米巴角膜炎（AK）早期诊断困难，严重威胁视力。研究人员开展通过体内共聚焦显微镜（IVCM）诊断 AK 的研究，发现 IVCM 检测率更高，还观察到多种诊断特征。这为 AK 诊断提供新依据，有助于将 IVCM 纳入标准诊断流程。

　　棘阿米巴角膜炎（Acanthamoeba keratitis，AK）是一种严重威胁视力的眼部疾病，在全球范围内，其发病率正随着隐形眼镜佩戴人数的增加而不断攀升。AK 早期症状不典型，常规诊断方法存在诸多局限，如裂隙灯检查难以发现早期病变特征，角膜刮片微生物检测受取材和检测时间限制，导致许多患者无法在疾病早期得到准确诊断和有效治疗，最终视力受损甚至失明。因此，寻找一种快速、准确的诊断方法迫在眉睫。

来自波兰华沙医科大学眼科以及英国曼彻斯特皇家眼科医院等机构的研究人员开展了一项关于通过体内共聚焦显微镜（in vivo confocal microscopy，IVCM）诊断 AK 的研究。该研究成果发表在《Scientific Reports》上，为 AK 的诊断开辟了新路径。

研究人员采用回顾性观察研究方法，收集了 2012 年至 2018 年期间曼彻斯特皇家眼科医院临床疑似 AK 患者的资料。这些患者均接受了 IVCM 检查，研究人员对 IVCM 图像中棘阿米巴和角膜细胞的形态特征（IVCM morphological features，IVCM-MF）进行分析，并与微生物培养结果及裂隙灯检查结果对比。

研究结果如下：

1. 诊断率对比：IVCM 对 AK 的检测率高达 85%（n=23/27），而微生物培养的检测率仅为 74%（n=20/27）。在微生物培养阴性的患者中，有 6 例通过 IVCM 检测呈阳性确诊为 AK，还有 1 例患者虽 IVCM 和培养均为阴性，但根据裂隙灯检查结果及抗阿米巴治疗后的临床改善确诊。这表明 IVCM 在 AK 诊断中具有更高的检测率，能有效发现微生物培养漏诊的病例。
2. 棘阿米巴 IVCM-MF：在 23 例 IVCM 检测阳性的患者中，“亮点” 形态最为常见，占 87%（n=20/23），多为高反射圆形物体，直径约 10 微米，偶尔也有较小直径和多边形的情况，部分亮点囊肿可位于上皮细胞内；双壁囊肿次之，占 56%（n=13/23） ，有亮中心和暗中心（“空囊肿”）两种类型；“印戒” 样囊肿占 22%（n=5/23）；滋养体较少见，仅在 30%（n=7/23）的患者中检测到，且形态多样，大小在 50 - 100μm 之间，常与亮点和双壁囊肿同时出现。
3. 角膜上皮细胞层 IVCM-MF：64%（n=14/22）的患者角膜上皮细胞呈现 “挖空细胞” 样外观，表现为细胞周核低反射暗 “晕”、灰色细胞质和高反射细胞边界，且 “亮点” 囊肿与这种外观相关；部分患者上皮细胞还存在大小不均的情况，少数患者可见 “大疱”。此外，6 例患者角膜基底神经丛的神经纤维呈串珠状，与多食棘阿米巴（A. polyphaga）培养阳性相关；10 例患者在基底角膜上皮层或基底神经丛附近可见树突状细胞。
4. 角膜基质和内皮 IVCM-MF：78%（n=18/23）的患者角膜基质中出现活化的角膜细胞；56%（n=13/23）的患者可见相邻角膜细胞核之间的曲线连接，12/23 的患者相邻角膜细胞通过 “微管” 相连，且该特征与 A. polyphaga 培养阳性相关；还有部分患者出现其他基质特征，如 “纺锤体”、粗大神经纤维束、“幽灵” 角膜细胞等。内皮异常较少见，仅 1 例患者出现高反射内皮细胞核，2 例患者在内皮细胞单层后部有树突状细胞。
5. IVCM-MF 与裂隙灯检查结果关联：裂隙灯检查中，“树枝状” 溃疡仅在 2 例 IVCM 阳性患者中出现，“环形浸润” 在 3 例 IVCM 阳性患者中出现，“神经周围浸润” 在 8 例培养阳性患者中出现，其中 7 例 IVCM 阳性。这些患者的 IVCM-MF 包括亮点、双壁囊肿和滋养体等。

研究结论和讨论部分指出，IVCM 在 AK 诊断方面具有显著优势，相比传统诊断方法，能更快速、准确地检测到棘阿米巴病原体，为早期治疗争取时间，改善患者视力预后。研究还发现除了棘阿米巴的形态特征外，角膜上皮和基质细胞的变化也可能作为 AK 诊断的潜在生物标志物，为 AK 的诊断提供了新的视角。然而，该研究存在样本量较小、回顾性研究和单中心数据等局限性。未来需要开展更大样本量、多中心的前瞻性研究，进一步验证这些发现，并探索 IVCM 与其他诊断方法的联合应用，以及利用人工智能技术提高诊断效率和准确性。

综上所述，这项研究为 AK 的诊断提供了重要依据，有望推动 IVCM 在临床 AK 诊断中的广泛应用，为眼科临床实践带来新的突破，让更多患者受益。

研究人员使用的主要关键技术方法包括：

1. IVCM 图像采集：使用 HRT3 IVCM 及罗斯托克角膜模块对患者角膜溃疡进行成像，采用体积扫描模式获取角膜不同深度图像，部分患者还进行单节扫描。
2. 微生物培养：对角膜刮片在大肠杆菌富集琼脂上进行培养，在诊断寄生虫学实验室依据囊肿形态鉴定棘阿米巴种类。
3. 图像分析与统计：由经验丰富的眼科医生对 IVCM 图像进行评估，分析棘阿米巴和角膜细胞的形态特征。利用 Stata 13.1 软件进行统计分析，采用逻辑回归、卡方检验或 Fisher 精确检验等方法处理数据。