基因编辑PRPF31+/? hiPSC-RPE细胞外囊泡RNA含量揭示视网膜变性的新型生物标志物潜力

《Molecular Therapy Methods & Clinical Development》：The RNA content of extracellular vesicles from gene-edited PRPF31+/? hiPSC-RPE show potential as biomarkers of retinal degeneration

本研究创新性地发现PRPF31基因缺陷型视网膜色素上皮细胞（hiPSC-RPE）分泌的细胞外囊泡（EVs）具有独特的RNA特征谱，鉴定出18种miRNA和865种poly(A)RNA可作为视网膜退行性病变的潜在循环生物标志物。作者通过对比基因编辑PRPF31+/+与PRPF31+/?模型，首次系统揭示了EVs RNA cargo与RPE功能状态的分子关联，为遗传性视网膜疾病（IRD）的早期诊断和治疗监测提供了新思路。

　　视网膜变性的分子哨兵：PRPF31缺陷型RPE细胞外囊泡RNA特征解析

视网膜色素上皮细胞（RPE）的功能障碍是遗传性视网膜疾病（IRD）的核心病理机制。本研究利用CRISPR-Cas9构建的PRPF31^+/?人诱导多能干细胞来源RPE（hiPSC-RPE）模型，首次系统揭示了疾病状态下细胞外囊泡（EVs）的RNA特征变化。

PRPF31基因作为常染色体显性视网膜色素变性（RP）的主要致病基因，其单倍剂量不足会导致RPE吞噬功能缺陷和屏障功能障碍。研究者通过纳米颗粒追踪分析（NTA）和透射电镜（TEM）证实，突变型与野生型RPE分泌的EVs在数量和形态上无显著差异，但RNA内容存在显著差异。

RNA测序技术揭示了惊人的发现：EVs携带了源细胞64%的miRNA和90%的poly(A)RNA。在PRPF31^+/? EVs中，12种miRNA显著富集而6种减少，865种poly(A)RNA呈现差异表达。值得注意的是，EVs还含有约1.2万种源细胞中未检测到的独特转录本，其中长链非编码RNA（lncRNA）占比高达30%。

功能分析显示，差异miRNA与视网膜变性密切相关。其中miR-129-5p等6种miRNA通过靶向CDH1（E-cadherin）调控RPE细胞去分化过程，而RDH11等视网膜代谢关键基因也受到特异性miRNA调控。这些发现为理解PRPF31突变导致视网膜特异性病变提供了新视角。

该研究建立的EVs RNA特征谱不仅揭示了RPE功能状态的分子指纹，更为重要的是为缓慢进展的视网膜疾病提供了可监测的液体活检标志物。在基因治疗时代，这些循环RNA标志物有望解决临床试验中疗效评估滞后的难题，为PRPF31-RP及其他IRD的精准诊疗开辟了新途径。