综述：重组腺相关病毒生产平台的工艺与质量考量

《TRENDS IN Biotechnology》：Process and quality considerations for recombinant adeno-associated virus manufacturing platforms

这篇综述系统梳理了重组腺相关病毒（rAAV）基因治疗载体的规模化生产进展，重点分析了从贴壁培养向悬浮细胞生物反应器技术的转型趋势，对比了转染（transfection）、感染（infection）及稳定生产细胞系三大平台在可扩展性与产品质量控制上的优劣，并探讨了无血清培养基、亲和层析（affinity chromatography）等关键技术突破对空壳/完整衣壳分离的解决方案，为符合GMP标准的rAAV工业化生产提供了全面指导。

　　

Highlights

重组腺相关病毒（rAAV）作为基因治疗的核心载体，其生产工艺正经历从贴壁培养到大规模悬浮生物反应器的革命性转变。三大主流生产平台——瞬时转染（transient transfection）、病毒感染（viral infection）和稳定生产细胞系（producer cell lines）各具特色：转染法灵活性高但批次间差异大，而基于HEK293或Sf9细胞的悬浮系统显著提升了产量可扩展性。

培养基与培养工艺革新

无血清（serum-free）和化学成分限定（chemically defined）培养基的突破解决了动物源成分带来的安全风险，同时优化了细胞密度与病毒滴度。例如，添加Pluronic F-68可减少剪切力对悬浮细胞的损伤，使载体产量提升3-5倍。

下游纯化技术攻坚

空壳衣壳（empty capsids）的去除是行业痛点，新型亲和层析树脂如AVB Sepharose^TM可特异性捕获完整衣壳，结合阴离子交换层析（AEX）能将空壳率降至<5%。切向流过滤（TFF）技术的改进进一步提高了载体回收率。

质量分析与合规性

毛细管电泳（CE-SDS）和动态光散射（DLS）等分析手段可精准检测衣壳完整性，而ddPCR（微滴式数字PCR）技术将载体基因组滴度检测灵敏度推进至0.1 copy/μL。监管机构对产品相关杂质（如宿主细胞DNA<0.1 ng/dose）的要求正推动生产工艺的持续优化。

未来挑战

尽管悬浮培养已实现2000L级生产，但载体翻译后修饰（如酪氨酸磷酸化）的批次间一致性仍是难题。基因编辑技术与AI驱动的培养基优化或将开启下一代rAAV生产的新纪元。