《CSF3R-AS：肝癌进展与索拉非尼耐药的关键 “推手” 及潜在治疗新靶点》

为探究肝癌（HCC）新治疗靶点和耐药机制，中南大学湘雅医院等研究人员开展了关于反义 circRNA（CSF3R-AS）的研究。结果发现 CSF3R-AS 可促进 HCC 进展和索拉非尼耐药，阻断相关正反馈回路有望提供新治疗靶点。

　　** 在当今医学领域，恶性肿瘤严重威胁着人类的生命健康，其中肝癌的死亡率位居第二。肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是肝癌中最常见的类型，占比超过 90%。尽管目前针对 HCC 的治疗手段多样，包括手术、化疗、放疗、介入治疗、免疫治疗、靶向治疗以及中西医结合治疗等，在一定程度上改善了患者的预后，但由于多数患者确诊时已处于疾病晚期，且耐药问题普遍存在，HCC 患者的五年总生存率仅为 18%。因此，探索 HCC 新的治疗靶点和耐药机制迫在眉睫。

为了攻克这一难题，中南大学湘雅医院等机构的研究人员开展了一项关于反义 circRNA（antisense circular RNA）在 HCC 中作用的研究。研究发现，一种名为 CSF₃R-AS 的反义 circRNA 在 HCC 中显著上调，且与患者的不良预后相关。CSF₃R-AS 通过与它的亲本 mRNA CSF₃R 结合，并招募 RBMS3 蛋白来稳定 CSF₃R，进而激活 JAK2/STAT3 信号通路，促进 HCC 的增殖、侵袭、血管生成，并抑制细胞凋亡。更为重要的是，研究人员还发现存在一个 CSF₃R-AS/CSF₃R/JAK2/STAT3 正反馈回路，这个回路不仅促进了 HCC 的进展，还在 HCC 对索拉非尼（sorafenib）耐药过程中发挥关键作用。阻断该正反馈回路有望提高 HCC 对索拉非尼的敏感性，为 HCC 的治疗提供新的研究方向和治疗靶点。该研究成果发表在《Cell Death and Disease》杂志上。

研究人员在开展此项研究时，运用了多种关键技术方法。首先，通过收集 52 例 HCC 患者的肿瘤及癌旁组织样本，为研究提供了临床样本基础。接着，采用下一代测序技术筛选出差异表达的 circRNA；利用定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测相关 RNA 的表达水平；运用蛋白质免疫印迹法（Western blot）分析蛋白表达情况；借助免疫组织化学（IHC）技术观察蛋白在组织中的定位和表达；还通过构建细胞模型和动物模型，开展体内外功能实验 。

下面详细介绍研究结果：

• CSF₃R-AS 在 HCC 中上调且与不良预后相关：研究人员对 3 例 HCC 肿瘤组织和配对的癌旁组织进行 circRNA 测序，发现有 339 种差异表达的 circRNA，其中 16 种为反义 circRNA。进一步分析发现，只有 hsa_circ_0000055（即 CSF₃R-AS）在 HCC 中显著上调。通过多种实验验证了 CSF₃R-AS 的环状结构及其主要定位于细胞质。临床病理分析表明，CSF₃R-AS 高表达的 HCC 患者总生存期（OS）更差，且其表达与肿瘤大小、血管侵犯和 TNM 分期相关，多因素分析显示其可作为 HCC 患者预后的独立危险因素。
• CSF₃R-AS 促进 HCC 进展：研究人员检测了 CSF₃R-AS 在多种细胞系中的表达，并在 Huh6 和 HCCLM3 细胞中敲低 CSF₃R-AS，在 Huh7 和 Hep3B 细胞中过表达 CSF₃R-AS。体外实验结果显示，敲低 CSF₃R-AS 抑制细胞增殖、侵袭和血管生成，促进细胞凋亡；过表达则产生相反的效果。体内实验通过建立异种移植小鼠模型和肺转移模型，证实 CSF₃R-AS 可促进 HCC 的生长和转移。
• CSF₃R-AS 通过招募 RBMS3 蛋白增加 CSF₃R mRNA 的稳定性：研究发现 CSF₃R-AS 与 CSF₃R mRNA 存在 180 个反向互补配对碱基对。通过一系列实验，包括 qRT-PCR、RNA 稳定性实验、RNA pull-down 实验和荧光原位杂交（FISH）等，证实 CSF₃R-AS 可与 CSF₃R mRNA 结合，招募 RBMS3 蛋白，进而稳定 CSF₃R 的表达。
• CSF₃R-AS 缺失突变不能调节 CSF₃R mRNA 的表达和 HCC 进展：构建缺失 180bp 的 CSF₃R-AS 突变质粒（CSF₃R-ASM）后发现，其不能影响 CSF₃R mRNA 的表达，也不影响 CSF₃R mRNA 与 RBMS3 的结合，对 HCC 细胞的增殖、侵袭和凋亡无影响。
• CSF₃R-AS 通过 CSF₃R-AS/CSF₃R/JAK2/STAT3 正反馈回路促进 HCC 进展：研究发现粒细胞集落刺激因子（G-CSF）可激活 JAK2/STAT3 信号通路，促进 HCC 细胞增殖、侵袭，抑制凋亡。CSF₃R-AS 可通过 CSF₃R 激活 JAK2/STAT3 通路，调节下游靶基因的表达。同时，STAT3 可作为 CSF₃R-AS 的转录因子，促进其表达，从而形成正反馈回路，促进 HCC 进展。
• CSF₃R-AS/CSF₃R/JAK2/STAT3 正反馈回路促进 HCC 的索拉非尼耐药：研究人员建立了索拉非尼耐药的 HCC 细胞系（HCCLM3-SR 和 HepG2-SR），发现耐药细胞中 CSF₃R-AS、CSF₃R 以及 JAK2/STAT3 信号通路均显著激活。阻断该正反馈回路，无论是在体外细胞实验还是体内动物模型实验中，都能显著抑制耐药细胞的增殖，提高 HCC 对索拉非尼的敏感性。

综上所述，该研究首次鉴定出反义 circRNA CSF₃R-AS 在 HCC 中的重要作用，揭示了其促进 HCC 进展和索拉非尼耐药的分子机制，为 HCC 的治疗提供了新的潜在靶点。然而，研究也存在一定的局限性，如 HCC 患者样本量相对较小，且未检测血清样本中 CSF₃R-AS 的表达，在一定程度上限制了其临床应用。未来需要进一步扩大样本量，深入研究 CSF₃R-AS 在血清中的表达情况，以推动该研究成果向临床应用转化，为 HCC 患者带来新的希望。**