一种用于结核病及多药耐药诊断的多重实时荧光定量 PCR 技术的开发及其意义

《Current Microbiology》：Development of a Multiplex Real-Time PCR for Diagnosis of Tuberculosis and Multidrug Resistance

为解决结核病及多药耐药的诊断问题，研究人员开展了开发一种多重实时荧光定量 PCR（qPCR）方法的研究。该方法经优化后，检测限为 124 cfu/mL，对 273 例临床样本检测 RIF 和 INH 耐药的灵敏度和特异性≥99%，可作为现有分子诊断方法的替代方案。

　　本研究旨在开发一种用于诊断结核病和多药耐药的多重定量聚合酶链式反应（qPCR）方法。该方法由两种多重 qPCR 混合液构成，第一种 PCR 混合液用于检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）和利福平（RIF）耐药情况，第二种用于检测异烟肼（INH）耐药情况。首先，对 PCR 扩增条件、引物和探针浓度进行优化。随后，分析其分析灵敏度 / 检测限（LOD）、分析特异性、重复性、准确性以及在临床样本中的有效性。检测限（LOD）值确定为 124 cfu/mL。在对 273 例临床样本的研究中，检测利福平（RIF）和异烟肼（INH）耐药的灵敏度和特异性均≥99%。准确性研究中未出现假阳性或假阴性结果。在实验内、实验间和批间重复性研究中，变异系数在 0.36 - 5.3% 之间。研究还发现，该检测中使用的引物 / 探针不会与结核分枝杆菌复合群以外的微生物发生交叉反应。综上所述，本研究优化的方法具有高性能特征，表明其可作为现有分子方法的替代方案，用于快速、准确诊断肺结核和多药耐药，且无需特殊设备。未来利用不同临床样本开展进一步研究，将有助于为该方法的常规应用提供更多数据。