基于多表位设计的流感病毒通用疫苗：诱导交叉反应性CD8+T细胞应答的新策略

《Scientific Reports》：Design and evaluation of a poly-epitope based vaccine for the induction of influenza A virus cross-reactive CD8?+?T cell responses

为应对流感病毒抗原漂移和疫苗匹配难题，德国汉诺威兽医大学等机构研究人员设计了一种含20个保守CD8+T细胞表位的重组MVA疫苗（rMVA-PE）。通过体外实验和HLA转基因小鼠模型证实，该疫苗能有效激活交叉反应性T细胞应答，覆盖99.5%人群HLA类型，为开发不依赖年度更新的通用流感疫苗提供了新思路。

　　

流感病毒因其抗原漂移（antigenic drift）和跨物种传播特性，迫使疫苗需每年更新且对新型亚型防护有限。传统疫苗依赖诱导中和抗体，但血凝素（HA）头部的高变异性导致保护范围狭窄。尽管针对HA保守区的抗体策略取得进展，CD8⁺T细胞识别内部保守蛋白（如NP、M1）的特性为广谱保护提供了新方向。然而，现有灭活疫苗难以有效激活此类T细胞应答。

为解决这一难题，德国汉诺威兽医大学、慕尼黑大学等机构的研究团队在《Scientific Reports》发表研究，设计了一种基于20个高度保守CD8⁺T细胞表位的多表位疫苗（rMVA-PE），以改良痘苗病毒安卡拉株（MVA）为载体，融合泛素和AAY间隔序列以优化表位释放。通过体外PBMC实验和HLA-A*02:01转基因小鼠模型，证实其可激活针对不同流感亚型的交叉反应性T细胞应答。

关键技术包括：1）从免疫表位数据库（IEDB）筛选保守表位，覆盖人类、禽类和猪源流感病毒；2）构建重组MVA表达多表位-泛素融合蛋白；3）利用HLA转基因细胞验证表位呈递；4）通过IFN-γ ELISpot和流式细胞术评估免疫原性。

研究结果
表位选择与疫苗设计
从IEDB筛选的20个表位（如NP_265-274、M1_58-66）在人类、禽类和猪源流感病毒中保守性达50%-99%，覆盖99.5%人群HLA类型。通过AAY间隔序列和泛素融合优化蛋白降解，确保表位有效释放。

疫苗构建与表达验证
rMVA-PE在鸡胚成纤维细胞（CEF）中高效表达，经PCR和免疫染色确认。多步生长曲线显示其在哺乳动物细胞中保持复制缺陷，符合安全标准。

体外抗原性与免疫原性
HLA转基因A549细胞和单核细胞感染rMVA-PE后，成功激活针对NP_44-52、M1_58-66等表位的CD8⁺T细胞，且应答强度与天然病毒刺激相当。

体内免疫应答
HLA-A*02:01转基因小鼠接种rMVA-PE后，脾细胞产生特异性IFN-γ应答，靶向M1_58-66表位，而野生型MVA对照组无此反应，证实疫苗诱导的T细胞应答具有流感特异性。

结论与意义
该研究首次证明多表位-MVA疫苗可系统性诱导交叉反应性CD8⁺T细胞应答，克服了传统疫苗的HLA限制和亚型依赖性。其设计策略不仅适用于季节性流感，还能应对潜在 pandemic 病毒（如H5N1）。未来临床测试若成功，该疫苗或可作为现有疫苗的补充，缩短 pandemic 响应时间，降低疾病严重程度。此外，该平台技术可扩展至其他快速变异病原体的通用疫苗开发。