印度昌迪加尔市环境及蔬菜中弓形虫分子检测与系统发育分析的首次报告

《Scientific Reports》：First report of molecular detection and phylogenetic analysis of Toxoplasma Gondii in soil, water and vegetables from Chandigarh city, India

推荐语：为解决印度缺乏环境源弓形虫(T. gondii)流行病学数据的问题，昌迪加尔医学教育与研究学院团队首次采用常规PCR、实时PCR和实时环介导等温扩增(LAMP)技术检测当地水源、土壤及蔬菜样本。研究发现15%水体、9%土壤和6.4%蔬菜样本呈阳性，揭示环境传播风险，为公共卫生干预提供关键依据。

　　在温暖潮湿的印度北部城市昌迪加尔，一种肉眼不可见的威胁正潜伏在居民的日常生活环境中。弓形虫(Toxoplasma gondii)作为全球感染率高达30%的专性细胞内寄生虫，其卵囊通过猫科动物粪便污染环境后，能在水土中存活数月甚至数年。尽管食用未煮熟的肉类被认为是主要传播途径，但印度耆那教素食人群的高感染率暗示着环境传播的重要作用。令人担忧的是，这个拥有百万人口的现代化城市周边分布着23个基础设施薄弱的村庄和不断扩张的贫民窟，为流浪猫活动创造了条件，而印度此前从未开展过环境基质中弓形虫的分子流行病学研究。

为填补这一空白，昌迪加尔医学教育与研究学院的Divya Rattan团队在2020-2022年间开展了一项开创性研究。他们系统采集了昌迪加尔各区域的100份水体、100份土壤和500份市售蔬菜样本，采用多管齐下的分子检测策略：通过靶向甘油醛-3-磷酸脱氢酶(B1)基因的常规PCR进行初筛，再使用SYBR Green实时PCR提高灵敏度，同时创新性地应用同时靶向B1和弓形虫外壁蛋白(TgOWP)基因的实时LAMP技术进行交叉验证。对于阳性样本，还进行了Sanger测序和基于MEGA软件的分子系统发育分析。

研究结果揭示出严峻的现状：18%的饮用水源呈现阳性，包括政府学校、寺庙和医院的供水系统；9%的土壤样本在贫民区、医院和有机农场等地检出病原体；最令人意外的是6.6%的市售蔬菜被污染，其中香菜和葫芦巴叶污染率最高。技术对比显示，实时LAMP与实时PCR的检出率比常规PCR高3%，证实了前者在环境样本检测中的优势。分子进化树分析显示，这些分离株与伊朗猫源、墨西哥猪源以及印度患者分离株高度同源，且与ME49和RH标准株聚为一支，暗示可能存在跨物种传播。

在方法学部分，研究者针对不同样本类型优化了前处理流程：水体样本采用0.22μm滤膜过滤结合硫酸铝絮凝法富集卵囊；土壤样本通过蔗糖梯度离心纯化；蔬菜样本则经过表面冲洗和离心浓缩。DNA提取采用改良的Qiagen试剂盒方案，增加液氮冻融循环和延长裂解时间以提高回收率。

讨论部分强调了三个关键发现：首先，贫民区和水源阳性率最高，指向卫生条件与传播风险的直接关联；其次，香菜等褶皱叶菜更易滞留卵囊，提示蔬菜形态学特征影响污染程度；最后，气候因素使昌迪加尔温暖湿润的环境成为卵囊存活的"温床"。尽管B1基因测序未能区分虫株类型，但这是印度首次在环境介质中确证弓形虫存在，为解释素食人群感染机制提供了实证。

这项发表在《Scientific Reports》的研究具有里程碑意义：它不仅建立了适用于发展中国家资源限制条件下的环境病原体监测方案，更警示需要将"同一健康"(One Health)理念纳入城市规划——从改善贫民区卫生设施、规范流浪猫管理到加强农产品清洗规范。未来研究需扩大采样规模并联合多位点分型，以更全面评估环境传播在弓形虫病流行病学中的权重。