CCND1基因表达与启动子低甲基化在慢性乙型肝炎肝纤维化/肝硬化中的免疫调控作用

《Scientific Reports》：Accelerators of chronic hepatitis B fibrosis cirrhosis CCND1 gene expression and promoter hypomethylation

山东大学齐鲁医院团队针对慢性乙型肝炎(CHB)肝纤维化/肝硬化(LF/LC)诊断和治疗难题，通过分析140例临床样本和GSE84044数据集，发现CCND1基因在PBMCs中表达升高且启动子甲基化降低与疾病进展相关。单细胞测序揭示CCND1在M2巨噬细胞和T细胞高表达，GSEA分析显示其与NK细胞毒性及T/B细胞受体信号通路显著相关。该研究为CHB相关LF/LC提供了新型诊断标志物和免疫治疗靶点，成果发表于《Scientific Reports》。

　　

慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球重大公共卫生问题，约3亿人长期携带病毒，其中部分患者会逐渐发展为肝纤维化和肝硬化。这个漫长的病理过程涉及复杂的免疫调控机制，但目前临床仍缺乏有效的无创诊断标志物和特异性治疗靶点。尤其令人困扰的是，传统血清指标如FIB-4和APRI诊断准确性有限，而肝活检作为金标准又具有侵入性风险。在此背景下，山东大学齐鲁医院肝病研究所团队将目光聚焦于细胞周期调控关键分子Cyclin D1(CCND1)——这个在多种癌症和纤维化疾病中异常表达的基因，其在CHB相关肝纤维化/肝硬化中的角色却鲜有报道。

研究团队采用多组学整合分析策略，首先收集了140例临床样本（包括健康对照、CHB患者和CHB相关LF/LC患者）的外周血单个核细胞(PBMCs)，通过甲基化特异性PCR(MethyLight)和qRT-PCR检测CCND1启动子甲基化水平和mRNA表达。为验证发现，他们利用GEO数据库中的GSE84044肝组织转录组数据和GSE186343单细胞测序数据开展生物信息学分析，并运用CIBERSORT算法进行免疫浸润评估，最后通过基因集富集分析(GSEA)探索相关信号通路。

在"CCND1 mRNA表达和PMR值在不同组间的差异"部分，研究揭示了两项关键发现：肝硬化组PBMCs中CCND1 mRNA水平显著高于CHB组和健康对照（p<0.001），而其启动子甲基化水平（以PMR值表示）则显著降低。这种表达与甲基化的负相关关系（r=-0.62, p<0.0001）在GSE84044数据集肝组织样本中得到验证，证实CCND1表观遗传调控在CHB疾病进展中的保守性。

"单细胞分析"章节展示了突破性发现：通过分析5例G2期纤维化患者的单细胞转录组数据，研究人员成功鉴定出7种主要细胞类型，其中M2型巨噬细胞和T细胞表现出最强的CCND1表达信号。这一结果将CCND1的病理作用定位到特定免疫细胞亚群，为理解其在肝纤维化微环境中的功能提供了细胞层面的依据。

"CCND1的免疫浸润分析"揭示了更广泛的免疫调控网络。CIBERSORT算法显示CCND1表达与11种免疫细胞浸润程度显著相关：与M1巨噬细胞、γδ T细胞等促炎细胞呈正相关，而与M2巨噬细胞、调节性T细胞(Tregs)等抑制性细胞呈负相关。这种双向调控模式提示CCND1可能充当免疫平衡的"分子开关"。

"CCND1的GSEA分析"部分深入探讨了分子机制。高表达CCND1的患者显著富集于NK细胞介导的细胞毒性、T细胞受体(TCR)和B细胞受体(BCR)信号通路，这些通路正是抗病毒免疫的核心环节。特别值得注意的是，CCND1可能通过调控E2F转录因子影响淋巴细胞活化，为解释其免疫调节功能提供了理论框架。

在诊断价值方面，研究显示CCND1启动子甲基化的AUC值达到0.917，显著优于临床常规指标FIB-4(0.831)和APRI(0.844)。这一发现为开发无创诊断试剂盒奠定了坚实基础。

讨论部分强调了该研究的双重意义：理论上，首次阐明CCND1通过"甲基化-表达-免疫调控"三位一体机制参与CHB肝纤维化进程；临床上，CCND1甲基化检测有望成为新型液体活检标志物。团队也坦诚指出局限性：样本量较小且来自单中心，机制研究尚待动物实验验证。这些发现为开发针对CCND1的甲基化调节剂或免疫疗法提供了新思路，可能改变当前以抗病毒为主的CHB治疗格局。