c-Jun：开启神经母细胞瘤分化治疗新希望的关键因子

《Biology Direct》：c-Jun promotes neuroblastoma cell differentiation by inhibiting APC formation via CDC16 and reduces neuroblastoma malignancy

神经母细胞瘤（Neuroblastoma）分化机制不明且维甲酸（RA）治疗存在抵抗难题。河南大学研究人员开展 c-Jun 对神经母细胞瘤细胞分化影响的研究，发现 c-Jun 可促进分化、抑制细胞周期进展，或为治疗提供新靶点，为攻克该病带来新希望。

　　神经母细胞瘤作为儿童常见的胚胎性恶性肿瘤，起源于交感神经系统的发育过程，就像在神经系统发育的 “道路” 上出现了 “岔路”，这些未成熟的神经母细胞本该朝着成熟神经元的方向发展，却 “迷失了方向”，导致肿瘤的发生。其分化状态对患者预后影响极大，分化程度差的肿瘤往往更具恶性，患者生存状况堪忧。目前，维甲酸（RA）虽能诱导神经母细胞瘤细胞分化，在一定程度上改善高风险患者的无事件生存期，但治疗效果个体差异大，还存在耐药问题，这就像一把 “双刃剑”，在带来希望的同时又设置了重重障碍。因此，深入探究神经母细胞瘤分化的分子机制迫在眉睫，它是打开攻克这种疾病大门的关键钥匙。

河南大学的研究人员聚焦这一难题，开展了关于 c-Jun 对神经母细胞瘤细胞周期和分化影响的研究。他们发现，c-Jun 在神经母细胞瘤细胞分化过程中扮演着极为重要的角色，有望成为改善患者预后的新靶点。相关研究成果发表在《Biology Direct》上。

在研究过程中，研究人员运用了多种技术方法。细胞实验方面，通过构建稳定表达 c-Jun 过表达和敲低的细胞系，以及 CDC16 过表达和敲低的质粒，为后续实验奠定基础；利用 RNA 制备、cDNA 合成和实时定量 PCR（qRT-PCR）检测基因表达水平；采用 Western blot 技术分析蛋白质表达；借助免疫荧光染色观察细胞分化情况；运用流式细胞术分析细胞周期分布；通过免疫共沉淀（Co-IP）实验探究蛋白质间相互作用。此外，研究还纳入了多个神经母细胞瘤患者数据集进行分析。

研究结果主要包括以下几个方面：

• c-Jun 与神经母细胞瘤分化的关系：c-Jun 在大多数神经母细胞瘤细胞中表达较低，然而，当用 RA 诱导分化时，其表达显著上升。进一步研究发现，c-Jun 过表达能促进神经母细胞瘤细胞分化，在分化初期，相关分化标记物 GAP43 和 TUBB3 的表达明显增加，同时细胞出现明显的铺展和神经突生长。
• c-Jun 对细胞周期的影响：c-Jun 过表达使细胞周期停滞在 G₁期，减少 G₁/S 期转换，下调 S 期和 DNA 合成。同时，细胞周期相关蛋白表达发生变化，如 G₁期标记物 cyclin D1 上调，而 S 期到 M 期所需的 cyclin E₁、cyclin A₂和 cyclin B 下调，抑制细胞周期的 p21 蛋白上调。
• c-Jun 对细胞增殖和迁移的影响：c-Jun 过表达抑制神经母细胞瘤细胞增殖，EdU 增殖实验和 CCK-8 实验表明，c-Jun 过表达的细胞中 EdU⁺细胞比例显著降低，细胞活力下降，同时增殖相关基因 PCNA、ASCL₁、RIT₁、MYCN 和 ALK 的转录下调。此外，c-Jun 过表达还抑制细胞迁移和侵袭，伤口愈合实验和 Transwell 实验显示，c-Jun 过表达的细胞迁移和侵袭能力明显减弱，相关迁移标记物 MMP₂、MMP₉下调，TIMP₂上调，并且 c-Jun 可通过调节上皮 - 间质转化（EMT）和 WNT 信号通路抑制细胞迁移和侵袭。
• c-Jun 的预后意义：对四个神经母细胞瘤数据集的分析发现，高 c-Jun 表达与患者更好的总生存期（OS）和无事件生存期（EFS）相关，c-Jun 表达与患者生存呈正相关，与疾病死亡和高风险呈负相关，且其表达与神经母细胞瘤的临床分期负相关。
• c-Jun 与 CDC16 的相互作用：通过 Co-IP 实验和质谱分析，研究人员发现 c-Jun 能与 APC 的关键亚基 CDC16 相互作用，抑制 APC 形成。进一步研究表明，CDC16 参与了 c-Jun 介导的细胞分化和细胞周期调控过程，CDC16 过表达可消除 c-Jun 过表达诱导的细胞分化和细胞周期停滞，而 CDC16 敲低则增强 c-Jun 对细胞增殖和迁移的抑制作用。

综上所述，该研究表明 c-Jun 是神经母细胞瘤分化的关键调节因子。它通过两种机制发挥作用，一是利用其转录活性调节分化相关基因和细胞周期抑制剂的表达；二是与 APC 复合物中的关键成分 CDC16 相互作用，调节细胞周期，增强 G₁期停滞。这一发现为神经母细胞瘤的研究提供了新视角，揭示了 c-Jun 在促进神经母细胞瘤细胞分化、抑制细胞增殖和迁移方面的重要作用，为开发以 c-Jun 为靶点的新型抗肿瘤疗法提供了理论依据。未来，有望探索将 RA 与激活 c-Jun 的策略相结合，克服 RA 耐药问题，为神经母细胞瘤患者带来更有效的治疗方案，显著改善患者的预后。