Improved breast cancer diagnosis using a CA15?3 capture antibody?lectin sandwich assay：一种突破传统的乳腺癌诊断新策略

《Breast Cancer Research and Treatment 3.0》：Improved breast cancer diagnosis using a CA15-3 capture antibody-lectin sandwich assay

在乳腺癌诊断中，现有 FDA 批准的 CA15-3 检测存在局限性。研究人员开展了以 neuCA15-3 检测为主题的研究，用特定结合 Neu5Gc 的 SubB2M 进行检测。结果显示 neuCA15-3 检测分类准确率、灵敏度更高，该研究为乳腺癌诊断提供了新方向。

　　在肿瘤的世界里，癌细胞就像一群 “叛逆分子”，它们不断 “进化”，躲避人体免疫系统的 “追捕”。在众多变化中，癌细胞表面糖缀合物的异常糖基化是个关键特征。就拿乳腺癌来说，N - 羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc）在癌细胞表面糖缀合物中异常积累，这一现象引起了科学家们的关注。

目前，临床常用的 CA15-3 检测虽被 FDA 批准用于乳腺癌治疗反应监测和疾病复发监测，但在早期或局部乳腺癌检测中，其血清浓度并不总是升高，导致检测灵敏度较低，难以准确揪出早期 “隐藏” 的癌细胞。为了解决这一难题，来自澳大利亚的研究团队开展了一项研究，致力于寻找一种更精准的乳腺癌诊断方法。

该研究团队以一种基因工程改造的能特异性结合 Neu5Gc 的凝集素（SubB2M）为突破口，开发了一种 CA15-3 捕获抗体 - 凝集素夹心（neuCA15-3）检测方法，并将其与 FDA 批准的 Elecsys CA15-3 II 检测进行对比。

研究人员主要采用了以下关键技术方法：一是制备并纯化 SubB2M，通过重组表达、诱导表达、细胞破碎、纯化等一系列步骤获得高纯度的 SubB2M；二是进行生物素化修饰，使 SubB2M 能够更好地用于检测；三是开展临床样本检测，使用来自正常健康女性和乳腺癌女性的血清样本，在病例对照队列研究中评估两种检测方法的性能 。

研究结果如下：

1. SubB2M 检测特异性：通过 SubB2M-SubB2M 夹心检测，证实 SubB2M 对 Neu5Gc 修饰的蛋白质具有特异性结合能力，且结合依赖于唾液酸，对 Neu5Ac 修饰的蛋白质无识别能力。
2. 消除非特异性结合：鼠源捕获抗体可能存在与 Neu5Gc 结合的糖基，会导致非特异性结合。研究发现用 α_2-3,6,8,9神经氨酸酶预处理捕获抗体，可显著降低 SubB2M 的非特异性结合。
3. neuCA15-3 分析验证：对 neuCA15-3 检测进行分析验证，其定量限为 1 - 250 单位 /ml，总批间变异系数为 10%，各项性能指标符合临床实验室检测标准。
4. 疾病特异性：评估 neuCA15-3 在类风湿关节炎、子宫内膜异位症、II 型糖尿病和克罗恩病等疾病中的血清浓度变化，发现其在这些炎症性疾病与健康对照之间无显著差异，但在乳腺癌患者血清中浓度显著高于健康对照。
5. 回顾性病例对照队列研究：在回顾性病例对照队列研究中，neuCA15-3 检测在健康女性中的血清浓度显著低于 Elecsys CA15-3 II 检测；在乳腺癌患者中，neuCA15-3 的中位浓度约为 Elecsys CA15-3 II 检测的 1.8 倍。两种检测的 CA15-3 浓度在总体样本中显著相关，但在疾病不同阶段相关性不同。此外，neuCA15-3 检测的分类准确率为 81%，AUC 为 0.886±0.015，显著高于 Elecsys CA15-3 II 检测（分类准确率 55%，AUC 为 0.642±0.023）。同时，neuCA15-3 浓度在乳腺癌不同受体亚型间无显著差异，且不受高血压、胃肠道炎症、冠心病、肥胖等共病影响。

研究结论和讨论部分指出，neuCA15-3 检测通过同时靶向 CA15-3 蛋白表位和癌症相关聚糖（Neu5Gc）表位，显著提高了诊断性能。该检测产生的信号依赖于癌症抗原蛋白表位和蛋白质异常唾液酸化的共定位，从而增加了检测特异性；每个糖蛋白分子上多个 Neu5Gc 凝集素结合位点的存在增加了信号产生和检测灵敏度。此外，该检测不受炎症性疾病干扰，在分析上稳健且可重复。不过，该研究也存在一定局限性，目前的分类准确率不能直接推断其在无症状人群中的检测性能，还需要进一步开展前瞻性队列研究来评估其作为乳腺癌筛查测试的适用性。

总的来说，这项研究为乳腺癌诊断带来了新的曙光，neuCA15-3 检测有望为乳腺癌患者的临床管理提供更精准的信息，并且在多标志物筛查早期乳腺癌方面具有潜在应用价值。未来，若能将 neuCA15-3 与其他癌症生物标志物结合，可能会进一步提高乳腺癌的诊断性能，为乳腺癌的早诊早治带来更多希望。