靶向 FOXP3的全基因组 CRISPR 筛选，为自身免疫病细胞疗法开辟新路径

《Nature》：Genome-wide CRISPR screen in human T cells reveals regulators of FOXP3

为解决诱导调节性 T（iTreg）细胞不稳定、阻碍转化应用的问题，研究人员开展全基因组 CRISPR 功能缺失筛选研究。结果发现 RBPJ–NCOR 复合物负调控 FOXP3，敲除 RBPJ 可增强 iTreg功能，该成果为改善自身免疫病细胞疗法提供新方向。

　　调节性 T（T_reg）细胞特异性表达主转录因子 FOXP₃，在维持免疫耐受和体内平衡中起关键作用，有望革新自身免疫性疾病的细胞疗法。虽然在转化生长因子 β（TGFβ）和白细胞介素 2（IL-2）存在下刺激初始 CD4⁺ T 细胞可体外诱导出 FOXP₃⁺ T_reg细胞（iT_reg细胞），但这些细胞往往不稳定，阻碍了相关转化研究。系统了解调控 T_reg细胞分化的网络，可能会催生更有效的基于 iT_reg细胞的疗法。在此，研究人员进行了全基因组 CRISPR 功能缺失筛选，以梳理出原代人类 T 细胞中 FOXP₃诱导的基因调控决定因素，并利用 Perturb-icCITE-seq 在单细胞分辨率下对其作用进行表征。研究人员发现 RBPJ-NCOR 抑制复合物是一种新的、依赖特定环境的 FOXP₃表达负调控因子。靶向敲除 RBPJ 可增强 iT_reg细胞分化和功能，且不依赖经典 Notch 信号通路。体外反复进行细胞因子和 T 细胞受体信号刺激显示，与对照细胞相比，RBPJ 缺陷的 iT_reg细胞通过 FOXP₃增强子 CNS2 的 DNA 去甲基化，表现出更高的表型稳定性，从而强化了 FOXP₃表达。相反，RBPJ 过表达可通过 HDAC3 直接调节 FOXP₃的组蛋白乙酰化，有效抑制 FOXP₃的诱导。最后，在人源化小鼠模型中，RBPJ 缺失的人类 iT_reg细胞比对照 iT_reg细胞更有效地抑制异种移植物抗宿主病。总之，这些发现揭示了 FOXP₃的新调控因子，为提高自身免疫性疾病过继细胞疗法的疗效指明了新方向。