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推荐阅读！本文聚焦宏基因组下一代测序（mNGS）阴性报告，回顾性分析 150 例疑似无菌体液感染患者的临床和实验室信息，探讨其诊断准确性、假阴性率及影响因素，强调了 mNGS 阴性结果在临床应用中的作用及改进方向。
研究背景
传染病由病原微生物引发，严重威胁人类健康，全球因传染病死亡人数占总死亡人数的 28%。传统基于培养的病原体检测技术已无法满足临床需求，分子诊断技术因此迅速发展。宏基因组下一代测序（mNGS）凭借高通量、能检测不可培养和微量微生物等优势，在临床实验室中应用日益广泛，但该技术依赖专业生物信息学团队。此前对 mNGS 阴性结果的研究较少，尤其是在无菌体液方面，本文旨在分析 mNGS 阴性结果与疑似无菌体液感染患者病情的相关性及临床影响，并探究其影响因素。
材料和方法
- 研究人群和伦理：收集 2021 年 7 月 1 日至 2023 年 5 月 12 日台州恩泽医疗中心（集团）的 mNGS 检测数据，排除信息不完整的病例，最终纳入 150 例阴性结果患者。本研究经浙江省台州医院伦理委员会批准。
- 定义：由至少三名有传染病经验的主治医师组成的治疗团队，依据患者感染指标、病原检测、影像数据、治疗状况和临床症状综合判断临床感染诊断。根据诊断标准，判断 mNGS 结果为真阴性、假阴性或不确定阴性，以临床诊断为参考评估 mNGS 检测的阴性预测值，并将 mNGS 阴性结果的临床影响分为积极影响和无影响。根据疑似感染症状出现后 mNGS 采样时间，将患者分组。
- 样本检测：对无菌体液和组织样本进行 mNGS 检测，包括采样预处理、DNA 提取、文库构建和测序、生物信息学分析。同时进行培养检测和组织病理学检测。
- 统计分析：用描述性统计汇总人口统计学数据，用 Mann - Whitney U 检验分析感染相关炎症标志物，用 t 检验比较连续变量，以 P≤0.05 为差异有统计学意义。
研究结果
- 患者临床特征：150 例患者中，血浆组 50 例，脑脊液（CSF）组 57 例，其他组 43 例。18.0% 的患者在重症监护病房（ICU），56.0% 为男性，中位年龄 57.5 岁。多数患者在 mNGS 检测前接受了经验性抗菌治疗。
- mNGS 结果判断：所有阴性 mNGS 检测中，真阴性占 48%，假阴性占 42.7%，不确定阴性占 9.3%。血浆、CSF 和其他组的阴性预测值分别为 72.0%、40.4% 和 30.2%。血浆组部分血培养阳性结果被判断为污染，CSF 组 CSF 培养阳性结果也被认为是污染，其他组有部分样本经组织病理学或其他检测确诊为结核感染。
- 阴性结果的临床影响：血浆、CSF 和其他组阴性 mNGS 结果对患者有积极临床影响的比例分别为 68.0%、40.4% 和 25.6%。mNGS 阴性结果影响患者诊断、治疗和预后，部分患者根据结果改变治疗方案，多数患者治疗前后未改变治疗方案且病情改善。
- mNGS 检测阴性结果的相关因素：疑似感染症状出现后半个月内，mNGS 检测的真阴性率随时间下降。分析 mNGS 假阴性和不确定阴性患者的临床信息发现，不同组患者在科室分布、入院症状和医生判断的可能病原体方面存在差异。
讨论
本研究分析了血浆、CSF 和其他组 mNGS 阴性结果与患者病情的关系，以及症状出现到采样时间对结果的影响。mNGS 需与其他病原体检测技术结合，综合判断临床感染。mNGS 阴性结果的解读存在挑战，部分病原体因自身特性、数据库不完整或样本中病原体载量低等原因，导致 mNGS 检测灵敏度低、阴性预测能力差。本研究存在局限性，未整合其他实验室检测技术深入分析假阴性原因，也未探讨解决实际问题的方法。总体而言，血浆组 mNGS 检测真阴性率最高，建议对疑似感染患者尽早进行 mNGS 检测，CSF 和其他组假阴性率较高，可从患者科室分布、入院症状和临床判断等方面分析原因，以提高 mNGS 在临床感染诊断中的应用价值。
