低温培养抑制鱼类 CRISPR-Cas9 脱靶突变：解锁基因研究精准新路径

为解决 CRISPR-Cas9 脱靶突变问题，研究人员开展鱼类低温培养研究，发现可降低脱靶率，获可靠数据。

　　在鱼类基因功能研究中，CRISPR-Cas9 基因敲除（Gene knockout）技术被广泛应用。然而，CRISPR-Cas9 有时会引发意外的基因改变，即脱靶突变（off-target mutations），这会影响表型分析（phenotypic analysis）数据的可靠性。本研究聚焦于对诱变有显著影响的培养温度，探究在青鳉（medaka）和斑马鱼（zebrafish）早期胚胎中导入 CRISPR-Cas9 后进行低温培养，是否能抑制脱靶突变。持续在 16°C 培养青鳉，相比 28°C，脱靶突变率显著降低，但青鳉胚胎存活率下降。因此，对青鳉和斑马鱼均只在早期发育阶段进行低温培养，之后升温至 28°C。在此条件下，青鳉三个脱靶区域（Off-D、Off-P 和 Off-A）的突变率显著下降，而三个靶标区域（DJ-1、p4hb和avt）的突变率不受影响。同样，斑马鱼靶标区域（ywhaqa）的突变率依旧很高，但其脱靶区域（Off-Y1）的突变率显著降低。此外，该方法有效抑制了青鳉脱靶突变的种系传递（germ line transmission）。这一方法有助于从青鳉和斑马鱼的 G₀代获取更可靠的数据，还可能减少在 F₁代筛选去除携带脱靶突变个体的工作量。