RASON：驱动非小细胞肺癌 KRASG12C突变致癌进程的关键靶点与潜在治疗新希望

《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》：RASON promotes KRASG12C-driven tumor progression and immune evasion in non-small cell lung cancer

为解决 KRASG12C抑制剂临床耐药问题，研究人员开展 RASON 在非小细胞肺癌（NSCLC）中作用研究，发现 RASON 促癌且可作治疗靶点，意义重大。

　　

非小细胞肺癌研究新突破：RASON 成为关键治疗靶点

肺癌，这个隐匿在暗处的健康杀手，一直以来都是全球范围内严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤。其中，非小细胞肺癌（NSCLC）占据了肺癌病例的约 85%，犹如一座难以攻克的大山横亘在医学研究人员面前。在 NSCLC 的发病机制中，KRAS 基因突变频繁出现，大约 33.6% 的患者都携带这一突变，而 KRAS^G12C突变又是 KRAS 突变中较为常见的类型，在 NSCLC 病例中占比达 12 - 13%。

曾经，KRAS 蛋白由于其特殊的结构，与 GTP 有着极高的亲和力，并且缺乏合适的药物结合位点，使得针对它的靶向治疗困难重重，长期被视为 “不可成药” 的靶点。不过，近年来随着科研人员的不懈努力，终于取得了一些突破性进展。像索托拉西布（sotorasib，AMG - 510）和阿达格拉西布（adagrasib，MRTX - 849）等共价抑制剂相继问世，并且获得了美国食品药品监督管理局（FDA）的批准，在 KRAS^G12C突变的 NSCLC 临床治疗中展现出了一定的疗效。但令人遗憾的是，肿瘤细胞的狡猾超乎想象，内在和获得性耐药问题逐渐凸显，成为了阻碍这些抑制剂长期有效治疗的巨大障碍。因此，深入探究 KRAS^G12C驱动的致癌信号分子机制迫在眉睫。

在此背景下，南京鼓楼医院、南京大学生命科学学院等机构的研究人员展开了一项极具意义的研究。他们将目光聚焦在一个名为 RASON 的蛋白上，此前研究发现 RASON 在胰腺癌中对 KRAS 信号通路有调节作用，那么它在 NSCLC 中又扮演着怎样的角色呢？经过一系列深入研究，研究人员发现 RASON 在 KRAS^G12C突变的 NSCLC 中发挥着至关重要的作用，这一发现为 NSCLC 的治疗开辟了新的方向。该研究成果发表在《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》上。

为了开展这项研究，研究人员运用了多种关键技术方法。在样本方面，使用了来自不同患者队列的样本，包括商业组织微阵列样本、南京鼓楼医院收集的患者样本以及江苏省临床资源生物样本库的样本。技术上，采用免疫组化（IHC）分析 RASON 表达与 NSCLC 进展的关系；通过蛋白质免疫印迹（Immunoblotting）评估 RASON 对 KRAS^G12C下游信号通路的影响；利用 RNA 测序（RNA - seq）确定 RASON 调节的关键信号通路；借助免疫荧光、免疫沉淀、核磁共振（NMR）等技术验证 KRAS^G12C与 RASON 的相互作用；运用吞噬实验和流式细胞术探究 RASON 对肿瘤免疫微环境的影响；构建小鼠模型进行体内实验研究肿瘤生长等。

下面来详细看看研究结果：

1. RASON 对小鼠 KRAS 驱动的肺癌发生至关重要：研究人员构建了 Rason^mut/mut小鼠模型和 LSL - Kras^G12D;LSL - Trp53^R172H/+;Rason^mut/mut（KPR）小鼠模型。通过微 CT 成像和 H&E 染色发现，与 LSL - Kras^G12D;LSL - Trp53^R172H/+（KP）小鼠相比，KPR 小鼠的肿瘤结节数量明显减少，肿瘤体积更小，并且 Rason 基因敲除（KO）显著延长了 KPR 小鼠的生存期。免疫组化分析还显示，KPR 小鼠肺肿瘤中 p - AKT 和 p - ERK 水平降低（p - AKT 和 p - ERK 是 KRAS 下游信号通路的关键标志物），巨噬细胞浸润增加。这表明 RASON 在小鼠 KRAS 驱动的肺癌发生过程中起着不可或缺的作用。
2. RASON 在 NSCLC 中高表达：对包含 80 例 NSCLC 样本的组织微阵列进行免疫组化染色发现，RASON 在肺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，并且其表达水平与肿瘤分期呈正相关。在另一组包含 44 例 KRAS 突变和 91 例 KRAS 野生型 NSCLC 患者的队列中，进一步证实了在 KRAS 突变患者中，RASON 表达与肿瘤分期正相关，与巨噬细胞浸润负相关，高表达 RASON 的 KRAS 突变患者生存期更短。这些结果充分说明 RASON 在 KRAS 驱动的肺癌中发挥着关键作用，推动了肿瘤的发生和恶性进展。
3. RASON 促进 NSCLC 细胞系中致癌性 KRAS^G12C信号传导和肿瘤生长：在四种人类 KRAS^G12C突变的 NSCLC 细胞系中，研究人员发现 RASON 表达水平存在差异。通过 siRNA 瞬时敲低 RASON，显著下调了 KRAS 下游的 MAPK（RAF - MEK - ERK）和 PI3K - AKT 信号通路，抑制了细胞增殖。相反，在 RASON 低表达的细胞系中过表达 RASON，则增强了这些信号通路，促进了细胞增殖和集落形成，加速了体内肿瘤生长。这表明 RASON 是 NSCLC 中 KRAS^G12C效应信号的关键调节因子，沉默 RASON 能有效抑制肿瘤生长。
4. RASON 直接结合 KRAS^G12C并使其稳定在 GTP 结合的高活性状态：免疫荧光染色显示 RASON 与 KRAS^G12C在细胞内共定位，免疫沉淀和核磁共振实验进一步证实了它们之间的直接相互作用。RASON 基因敲除后，KRAS^G12C突变细胞系中活性 KRAS - GTP 水平显著下调。生化实验表明，RASON 能够抑制 KRAS^G12C的内在和外在 GTP 酶活性，但对其核苷酸交换没有影响。RNA 测序分析发现，RASON 基因敲除导致 KRAS 下游信号通路发生显著变化，这一系列结果表明 RASON 直接结合 KRAS^G12C，使其稳定在高活性的 GTP 结合状态，调节下游信号通路，从而发挥促癌作用。
5. RASON 基因敲除抑制肺癌进展并恢复体内巨噬细胞浸润：研究人员利用人肺癌细胞系 H358、小鼠肺癌细胞系 LLC 和 KRAS^G12C转化的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF^G12C）进行实验，发现 RASON 基因敲除抑制了 KRAS 下游信号通路，减少了体外细胞增殖，抑制了体内肿瘤生长。在 LLC 来源的肺癌肿瘤中，RASON 基因敲除显著增加了巨噬细胞浸润，同时降低了 CD47 表达。这表明 RASON 通过上调 CD47 抑制巨噬细胞浸润，促进肺癌进展和免疫逃逸，而 RASON 基因敲除则能逆转这一过程。
6. RASON 促进肿瘤逃避巨噬细胞吞噬：通过流式细胞术分析 LLC 肺癌定植模型中巨噬细胞和 T 细胞的浸润情况，发现 RASON 基因敲除显著增加了活化巨噬细胞和 M1 巨噬细胞的浸润，减少了 M2 巨噬细胞的浸润，但对 T 细胞浸润没有显著影响。体外吞噬实验表明，在 RASON 高表达的细胞系中，RASON 基因敲除显著增加了巨噬细胞介导的吞噬作用，而在 RASON 低表达的细胞系中过表达 RASON 则降低了吞噬作用。这说明 RASON 激活癌细胞中的 CD47 表达，抑制巨噬细胞介导的吞噬作用，从而帮助肿瘤逃避先天免疫监视，促进肿瘤进展。
7. RASON 是 KRAS^G12C突变 NSCLC 的潜在治疗靶点：在两个独立的肺腺癌队列中，研究人员发现 RASON 与 CD47 表达呈正相关。在体内治疗实验中，使用 RASON 反义寡核苷酸（RASON - ASO）和 KRAS^G12C抑制剂 AMG - 510 进行联合治疗，结果显示 RASON - ASO 单独治疗与 AMG - 510 具有相似的抑瘤效果，二者联合治疗显著增强了抑瘤作用。免疫组化染色结果表明，RASON - ASO 治疗不仅抑制了细胞增殖，还增加了巨噬细胞浸润，下调了 CD47 表达。这充分说明 RASON 是一个有前景的治疗靶点，与 KRAS^G12C抑制剂联合使用可能会提高 NSCLC 的治疗效果。

研究结论和讨论部分表明，该研究揭示了 RASON 是 KRAS^G12C信号通路的关键致癌调节因子，在 NSCLC 的发生、发展和免疫逃逸中发挥着重要作用，是 KRAS^G12C突变 NSCLC 的一个有潜力的治疗靶点。虽然研究存在一些局限性，如 RASON 与 KRAS^G12C相互作用的精确分子机制尚待阐明，RASON 对组织特异性免疫的影响还需进一步研究，RASON 靶向策略的安全性和有效性也需要在临床前和临床研究中进一步验证，但这项研究为 NSCLC 的治疗提供了新的思路和方向，为后续的研究奠定了坚实的基础，有望为肺癌患者带来新的希望。