犬恶性乳腺肿瘤中 BAG-1 表达上调：潜在的诊断与预后新靶点

《Discover Animals》：Expression of BCL2 associated athanogene-1 is up-regulated in canine malignant mammary tumors

在犬乳腺肿瘤诊断面临挑战的情况下，研究人员开展了犬恶性乳腺肿瘤中 BCL2 相关 athanogene-1（BAG-1）表达的研究。结果显示 BAG-1 在肿瘤中表达上调，且 mRNA 与蛋白表达相关，这为犬乳腺肿瘤诊断和预后判断提供了潜在生物标志物。

　　在宠物犬的健康问题中，乳腺肿瘤是雌性犬常见的疾病，这不仅影响着狗狗的生活质量，还对宠物医疗领域提出了挑战。目前，犬乳腺肿瘤的诊断主要依靠组织病理学，但这种方法存在一定局限性，且缺乏更多特异性的生物标志物用于精准诊断和预后评估。同时，虽然 BAG-1 在人类多种癌症中的作用已有研究，但在犬乳腺肿瘤方面还是空白。基于此，为了探索更有效的诊断和预后评估方法， Guru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences University 的研究人员开展了关于犬恶性乳腺肿瘤中 BAG-1 表达的研究。该研究成果发表在《Discover Animals》杂志上，为犬乳腺肿瘤的研究开辟了新方向。

研究人员采用了多种关键技术方法。首先，收集了手术中的犬乳腺肿瘤组织样本（n=20）以及健康对照样本（n=6），这些样本来源明确，确保了研究的可靠性。然后，运用组织病理学检查，对肿瘤进行分类和分级；通过 RNA 分离、cDNA 合成和实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）技术，检测 BAG-1 mRNA 的表达水平；利用基因克隆和异源表达技术，获取重组 BAG-1 蛋白；采用免疫组化（IHC）技术，检测 BAG-1 蛋白的表达情况，并进行半定量评分；最后，运用统计学分析，探究各指标之间的相关性。

研究结果主要分为以下几个方面：

1. 组织病理学分类和分级：对收集的样本进行组织病理学检查，结果显示犬乳腺肿瘤包括复杂癌（11 例）、未分化癌（4 例）、导管内乳头状癌（3 例）和恶性混合性乳腺肿瘤（2 例），其中 55%（n=11）的病例属于 I 级，30%（n=6）为 II 级，15%（n=3）为 III 级。
2. 定量实时荧光定量 PCR：通过 qRT-PCR 检测发现，BAG-1 mRNA 在犬乳腺肿瘤组织中的表达比健康腺体高 4.231 ± 0.342 倍，且 BAG-1、β-actin 和 RPS19 基因的扩增效率适宜，分别为 89.65%、91.60% 和 95.82%。
3. 克隆、表达和纯化重组 BAG-1：成功克隆出 BAG-1 基因，经测序确认后进行异源表达，获得了分子量约为 42kDa 的重组 BAG-1 蛋白，其浓度为 0.4mg/ml，总蛋白产量为 2.8mg / 升诱导培养物，且通过 Western blotting 证实了蛋白的存在和纯度。
4. BAG-1 蛋白在不同组织学类型犬乳腺肿瘤中的表达：免疫组化结果显示，BAG-1 蛋白在大多数犬乳腺肿瘤组织中呈强阳性表达（SI≥6），在健康组织中表达较弱（SI<6）。不同组织学类型的肿瘤中，BAG-1 蛋白的表达存在差异，未分化癌中可见异常的核染色。
5. BAG-1 mRNA 与 BAG-1 蛋白表达的相关性：在各种组织学类型的犬乳腺肿瘤中，BAG-1 mRNA 与 BAG-1 蛋白表达呈显著正相关（P<0.005），通过线性回归方程可根据 qRT-PCR 得分预测 H 得分。同时，不同组织学类型的犬乳腺肿瘤在 H 得分和 qRT-PCR 得分上存在显著差异（P<0.05），BAG-1 mRNA 和蛋白表达在未分化癌中最高，在恶性混合性乳腺肿瘤中最低。

研究结论表明，该研究首次报道了 BAG-1 在犬乳腺肿瘤中的过表达情况，BAG-1 蛋白在未分化癌中的表达最高，在健康乳腺组织中表达微弱。这一发现为犬乳腺肿瘤的诊断和预后评估提供了潜在的生物标志物，具有重要的临床意义。然而，由于样本量较小以及组织学类型和分级的多样性有限，后续还需要更大规模的研究来进一步验证这些结果。总体而言，该研究为犬乳腺肿瘤的研究提供了新的视角和方向，有助于推动宠物医学领域对犬乳腺肿瘤的深入理解和治疗进展。