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本文研究了腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)感染沃尔巴克氏体(Wolbachia,wTPut)和卡氏菌(Cardinium,cTPut)时,欧文氏菌科共生菌(SLS)对宿主和细菌基因表达的影响。发现 SLS 显著影响 cTPut 表达,且二者通过螨免疫和调节途径相互作用,该研究为分析共生菌与宿主关系提供新模型。
### 研究背景
细胞内共生细菌如卡氏菌(
Cardinium)和沃尔巴克氏体(
Wolbachia)广泛存在于节肢动物生殖组织中,可操控宿主生殖。卡氏菌在部分螨类中被发现,其基因组包含重要营养合成途径,但宿主是否利用这些代谢产物尚不明确。同时,细胞内共生菌与肠道微生物组间的相互作用逐渐受到关注,已有研究表明卡氏菌可影响螨类微生物群落组成。
腐食酪螨是常见仓储害虫,也是重要过敏原来源。此前研究发现卡氏菌在不同腐食酪螨培养物中的基因表达存在差异,本研究旨在探究这种差异是源于卡氏菌基因组不同,还是受其他共生菌(如欧文氏菌科共生菌 SLS)的影响。
实验材料与方法
- 样本采集与处理:从不同来源采集腐食酪螨样本,在特定培养基中培养。实验选用 42 天龄培养物,对样本进行表面清洁和消毒处理,分别收集成虫 / 若虫、粪便和卵样本,用于后续分析。
- 实验方法:采用单螨 PCR 和 qPCR 检测 SLS;样本经处理后进行 Illumina HiSeq 2000 测序,对测序数据进行处理、组装和注释;通过多种软件和工具进行分子分类和系统发育分析;运用多种统计方法分析基因表达数据,构建相关性网络。
实验结果
- 卡氏菌基因组分析:从不同螨培养物中组装出两个卡氏菌(cTPut)基因组,与先前测序的 cTPut 基因组高度相似。差异主要源于插入序列(IS)或其候选元件,如转座酶片段。距离 - 基于冗余分析(dbRDA)显示,SLS 和沃尔巴克氏体(wTPut)的存在影响 cTPut 基因表达,使其样本聚类不同。
- 欧文氏菌科共生菌基因组和转录组分析:首次报道 SLS 基因组,确定其为新物种,与伊扎克氏菌属(Izhakiella)关系密切。SLS 存在于螨体和粪便中,但不在卵中,其基因表达在不同螨培养物中存在差异。
- 卡氏菌基因表达差异:SLS 的存在显著影响 cTPut 基因表达,cTPut 在 SLS 阳性样本中有 29 个上调基因和 48 个下调基因,包括多个转座酶相关基因。cTPut 基因表达受 SLS 影响大于反之。
- 宿主与共生菌基因表达相互作用:SLS 影响螨宿主 KEGG 基因表达,cTPut 与螨宿主基因表达存在相关性。在 SLS 阳性样本中,螨宿主基因表达多样性降低,cTPut 涉及更广泛基因相互作用。
- 相关性网络分析:构建卡氏菌、欧文氏菌科共生菌与螨宿主的相关性网络,发现三者通过免疫和调节通路相互作用,如溶酶体、泛素介导的蛋白水解、PI3K - Akt 和 cGMP - PKG 通路。
- 对螨代谢通路的影响:SLS 影响螨代谢通路基因表达,在 SLS 存在时,螨的糖酵解和柠檬酸循环表达降低,cTPut 对代谢通路的影响在 SLS 阳性样本中减弱。
讨论
- 卡氏菌基因组相似性:两个 cTPut 基因组间的差异主要由转座元件导致,这些元件可能影响基因组可塑性,但需进一步研究。
- SLS 的特性与作用:SLS 是新发现的共生菌,可能对螨具有特异性,且可能在螨肠道中发挥作用。其能合成多种物质,但对宿主的益处需进一步证实,同时其受农药影响的机制也有待研究。
- 共生菌间及与宿主的相互作用:卡氏菌通过宿主间接影响肠道菌群,SLS 可影响卡氏菌基因表达。在 SLS 阳性样本中,卡氏菌与螨宿主免疫和调节通路的相关性增强,但区分特定受影响的螨通路仍具挑战。卡氏菌和 SLS 共同感染可能抑制螨的代谢通路。
研究结论
本研究表明共生菌显著影响螨的代谢和生理,尤其是免疫和调节通路。卡氏菌对螨宿主的影响因肠道共生菌的存在与否而异。这些发现对人类健康具有重要意义,因为腐食酪螨是人类环境中的重要过敏原,共生菌间的相互作用影响螨的过敏原产生,为理解和管理过敏原相关问题提供了重要依据。