Eurycomalactone：开启肝癌细胞休眠的新钥匙，或为抗癌治疗带来新曙光

《Scientific Reports》：Eurycomalactone switched hepatocellular carcinoma cells into quiescence through 5’tRFAla/DVL/β-catenin pathway inhibition

为探究 tsRNA 与小分子药物药理作用的潜在调节机制，广东医科大学等机构的研究人员开展了 eurycomalactone（ELT）对肝癌细胞作用的研究。结果发现 ELT 可使肝癌细胞进入静息状态，该研究为抑制肿瘤细胞生长提供新方向。

　　在生命的微观世界里，RNA 一直是个神秘而关键的角色。近年来，非编码 RNA 领域的研究不断升温，其中 tRNA 衍生的小 RNA（tsRNA）更是吸引了众多科研人员的目光。尽管 tsRNA 已被证实能像 miRNA 一样调节多种生理过程，但它与小分子药物药理作用之间的关系却如同迷雾，亟待揭开。肿瘤的治疗一直是医学领域的难题，肝癌作为一种常见且恶性程度较高的肿瘤，严重威胁着人类的健康。目前，临床上的小分子药物大多通过作用于蛋白质来发挥疗效，然而，人类基因组中仅有 1.5% 最终会翻译成蛋白质，且与疾病相关的蛋白质中，还有许多被认为是 “不可成药” 的靶点，这使得开发新型治疗策略迫在眉睫。在此背景下，广东医科大学等机构的研究人员开展了一项意义重大的研究，相关成果发表在《Scientific Reports》上。

为了探究 tsRNA 与小分子药物药理作用的潜在调节机制，研究人员将目光聚焦于一种从长叶斑鸠菊（Eurycoma longifolia）根部分离出的天然产物 ——eurycomalactone（ELT），以及它对肝癌细胞的影响。

研究人员运用了多种关键技术方法来开展研究。首先，通过 Arraystar 小 RNA 微阵列分析，检测 ELT 处理后细胞中 tsRNA 的表达变化；利用实时 RT-PCR 技术，对特定 tsRNA 和相关基因的表达水平进行定量分析；借助 Western blotting 技术，检测蛋白质的表达情况，以探究相关信号通路的变化 。实验所用的人肝癌细胞系 PLC/PRF/5 和 HUH7，均购自中国科学院上海细胞库。

研究结果主要体现在以下几个方面：

• ELT 抑制肝癌细胞增殖且不引起细胞死亡：通过 MTT 法、集落形成实验、EdU 染色实验和 Western blotting 检测发现，ELT 能显著抑制 PLC/PRF/5 和 HUH7 细胞的增殖，且呈剂量和时间依赖性。同时，ELT 不会诱导细胞凋亡或死亡，停止给药后细胞增殖可恢复。这表明 ELT 能抑制肝癌细胞增殖，但不具有细胞毒性12。
• ELT 诱导肝癌细胞周期阻滞在 G0/G1 期：对 PLC/PRF/5 和 HUH7 细胞进行不同浓度 ELT 处理后，通过流式细胞术分析细胞周期，发现 ELT 能使细胞周期阻滞在 G0/G1 期，且相关蛋白 CDK4 和 CDK6 的表达显著下调。结合上一结果，说明 ELT 可诱导肝癌细胞进入可逆的静息状态3。
• ELT 抑制肝癌细胞中的 β-catenin 通路：鉴于 β-catenin 在调节癌细胞增殖或静息中的重要作用，研究人员通过 Western blotting 分析发现，ELT 处理后，细胞中总 β-catenin、核 β-catenin 和细胞质 β-catenin 的含量，以及其下游靶蛋白 Cyclin D1、c-myc 和 Survivin 的表达均显著降低，表明 ELT 可抑制 β-catenin 通路4。
• ELT 处理的肝癌细胞中 tsRNA 的表达及相关分析：对 ELT 处理的 PLC/PRF/5 细胞进行 Arraystar 小 RNA 微阵列分析，发现有 3,937 个差异表达的 tsRNA，其中 1,874 个上调，2,063 个下调。通过 GO 和 KEGG 分析，发现差异表达 tsRNA 的靶基因主要富集在细胞增殖、细胞周期、凋亡等生物学过程，以及 MAPK、mTOR、Notch 和 Wnt 等信号通路。进一步研究发现，ELT 处理后，5’tRF^Ala和 5’tiRNA^Ala显著减少，且它们与 β-catenin 的上游调节蛋白 DVL2 和 DVL3 相关。过表达实验表明，只有 5’tRF^Ala的模拟物能增加 DVL2 和 DVL3 mRNA 的表达，并挽救 ELT 诱导的表达下降56。

研究结论指出，ELT 可通过抑制 5’tRF^Ala/DVL/β-catenin 通路，使 PLC/PRF/5 和 HUH7 细胞进入静息状态，该静息状态具有细胞增殖抑制、细胞周期阻滞在 G0/G1 期且停药后可恢复的特点。这一研究揭示了 tsRNA 在肿瘤细胞生长调节中的潜在作用，表明 tsRNA 可能像 miRNA 一样，在静息细胞中激活其匹配 mRNA 的翻译，为抑制肿瘤细胞生长提供了新的潜在方向 。尽管还需要更多的证据来证实，但该研究无疑为肝癌治疗及肿瘤生物学研究开辟了新的道路，为后续开发基于 RNA 调节的抗癌疗法提供了重要的理论依据和研究思路。