Zishen Yutai Pill 改善卵巢储备功能的研究：机制探索与潜在应用

《Journal of Ovarian Research》：Zishen Yutai pill ameliorates ovarian reserve by mediating PI3K-Akt pathway and apoptosis level in ovary

为解决卵巢储备功能下降（DOR）治疗难题，研究人员开展 Zishen Yutai Pill（ZYP）对 DOR 作用研究，发现 ZYP 可改善卵巢储备，为 DOR 治疗提供新方向。

　　

一、研究背景

在女性的生殖健康领域，卵巢储备（ovarian reserve）就如同一个 “生命时钟”，精准地反映着女性生育能力的 “库存量”，其好坏直接关系到女性的生育能力。卵巢储备功能下降（Diminished Ovarian Reserve，DOR）这一病症，正逐渐成为困扰众多女性的生育难题，它不仅导致女性体内卵母细胞数量减少、质量下降，还使得女性不孕症的发生率大幅上升。据统计，DOR 在卵巢相关疾病中占比约 20%，在不孕人群中的患病率约为 10%，且发病呈现出年轻化的趋势。

目前，临床针对 DOR 的治疗手段多种多样，像激素替代疗法（Hormone Replacement Therapy，HRT）、脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone，DHEA）补充疗法、促排卵治疗、辅助生殖技术（Assisted Reproductive Technology，ART）等。然而，这些疗法都存在着各自的问题。长期使用 HRT 会增加中风、心血管疾病、乳腺癌以及静脉血栓栓塞等疾病的风险；DHEA 的疗效存在争议，其安全性也有待进一步研究；促排卵治疗对于 DOR 患者效果不佳，因为患者卵巢反应差，卵母细胞质量也不理想；而卵子捐赠和卵巢移植则受到伦理、道德和法律等多方面的限制。因此，寻找一种安全有效的治疗 DOR 的药物迫在眉睫。

在这样的背景下，传统中药（Traditional Chinese Medicine，TCM）逐渐进入人们的视野。Zishen Yutai Pill（ZYP）作为一种在中国广泛应用于治疗生殖系统疾病的中药复方，由十五味药材组成，在临床实践中展现出了一定的疗效。但一直以来，ZYP 治疗 DOR 的药理作用和潜在机制并不明确。为了深入探究 ZYP 对 DOR 的治疗效果及其作用机制，广州医药研究总院有限公司药物非临床评价研究中心和广州白云山中药有限公司的研究人员开展了相关研究，研究成果发表在《Journal of Ovarian Research》上。

二、研究方法

研究人员选取了两种动物模型，分别是雷公藤多苷（Tripterygium Glycosides，TGs）诱导的 DOR 大鼠模型和 pZP3 诱导的 DOR 小鼠模型。在实验过程中，运用了多种技术方法。通过阴道细胞学检查来监测大鼠和小鼠的动情周期；对实验动物的体重、子宫和卵巢重量进行定期测量和记录；采用组织学观察，对卵巢进行苏木精 - 伊红（H&E）染色，来观察卵巢形态和卵泡分类；利用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清激素水平；借助 mRNA 测序和实时聚合酶链反应（qRT-PCR）技术，分析基因表达变化；使用 Cell Death Detection ELISA 试剂盒检测卵巢细胞凋亡情况。

三、研究结果

1. 对动情周期的影响：在 DOR 大鼠模型中，经过 28 天的给药处理，模型组大鼠动情后期延长，动情间期缩短，ZYP 虽不能完全逆转这一趋势，但能使 50% - 80% 的大鼠动情周期恢复规律，其中高剂量 ZYP 组（ZYP-H）的效果最为显著。在 DOR 小鼠模型中，模型组小鼠动情间期延长，ZYP 处理后，ZYP-L 和 ZYP-H 组小鼠动情间期显著缩短，ZYP-M 和 ZYP-H 组小鼠动情周期恢复规律的比例明显高于模型组。
2. 对生殖器官重量的影响：在 DOR 大鼠模型中，ZYP-H 组大鼠子宫重量和子宫指数显著低于模型组，但各组卵巢重量和卵巢指数没有明显差异。在 DOR 小鼠模型中，模型组小鼠卵巢重量和卵巢指数显著低于对照组，ZYP 处理后，卵巢重量和卵巢指数有增加的趋势，但未达到统计学意义。
3. 对卵巢储备的影响：通过对卵巢组织的 H&E 染色观察发现，在 DOR 大鼠模型中，与对照组相比，模型组原始卵泡和次级卵泡数量显著减少，窦卵泡数量显著增加；而 ZYP-M 和 ZYP-H 组的趋势则相反，且这两组的黄体数量显著增加。在 DOR 小鼠模型中，与对照组相比，模型组原始卵泡和黄体数量显著减少，次级卵泡数量显著增加；ZYP-M 和 ZYP-H 组的原始卵泡和黄体数量显著增加。这表明 ZYP 能够有效防止 DOR 模型中原始卵泡池的耗竭。
4. 对血清激素的影响：在 DOR 大鼠模型中，模型组血清抗苗勒管激素（Anti-Mullerian Hormone，AMH）和雌二醇（E₂）水平显著低于对照组，促卵泡生成素（Follicle-stimulating Hormone，FSH）和促黄体生成素（Luteinizing Hormone，LH）水平显著高于对照组。ZYP-H 和 DHEA 组的 AMH 水平显著高于模型组，ZYP-H 组的 E₂水平显著高于模型组，ZYP-L、ZYP-M、ZYP-H 和 DHEA 组的 FSH 和 LH 水平显著低于模型组。在 DOR 小鼠模型中，模型组血清 AMH 水平显著低于对照组，E₂和 LH 水平显著低于对照组，FSH/LH 水平显著高于对照组。ZYP-H 和 DHEA 组的 AMH、E₂和 LH 水平显著高于模型组，ZYP-M、ZYP-H 和 DHEA 组的 FSH/LH 水平显著低于模型组。
5. 对基因表达和细胞凋亡的影响：mRNA 测序结果显示，在 DOR 大鼠模型中，ZYP 处理后，PI3K-Akt 信号通路相关基因和凋亡分子基因 Bcl6、Abtb2 的表达发生了显著变化。qRT-PCR 验证结果与 mRNA 测序结果一致，表明 ZYP 能够调节 DOR 大鼠卵巢组织中的 PI3K-Akt 信号通路和凋亡分子基因。此外，Cell Death Detection ELISA 检测结果表明，ZYP 能够有效降低 DOR 大鼠卵巢细胞的凋亡水平，且呈剂量依赖性。

四、研究结论与讨论

本研究表明，ZYP 能够显著改善 DOR 模型的卵巢储备功能，其作用机制可能是通过调节 PI3K-Akt 信号通路和凋亡分子（Bcl6、Abtb2），降低卵巢细胞凋亡水平来实现的。这一研究结果为 ZYP 在临床治疗 DOR 中的应用提供了有力的理论依据。

然而，该研究也存在一些局限性。ZYP 治疗 DOR 的药理机制可能是多方面的，除了 PI3K-Akt 信号通路外，还可能与 p53、内分泌抵抗等信号通路有关，且其对细胞衰老和卵母细胞发育等方面的影响仍有待进一步验证。此外，中医临床应用强调辨证论治和个体化治疗，本研究中的 DOR 模型虽然在一定程度上模拟了肾虚证型，但仍无法完全解释 ZYP 在临床实践中的作用。

未来的研究应聚焦于深入阐明 ZYP 治疗 DOR 的综合药理机制，开展更大规模的临床试验，纳入更多样化的患者群体，以更好地明确其临床适用性和治疗效果，为 DOR 患者带来更多的希望。