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为解决仿制药肽杂质免疫原性评估问题，研究人员开展正交方法评估研究，结果有助于加速仿制药审批，保障用药安全。
在医疗领域，药物的可及性和安全性始终是备受瞩目的焦点。近年来，仿制药凭借其较低的成本，为广大患者带来了福音，仅在美国就为消费者节省了数十亿美元。其中，像 Ozempic 和 Wegovy（司美格鲁肽的商品名）这类知名肽类药物，其仿制药的研发更是如火如荼。这主要是由于参考上市药物（RLD）的供应短缺，促使人们对低成本且有效的仿制药需求激增。
然而，在仿制药的研发过程中，免疫原性问题逐渐浮出水面。免疫原性指的是物质（自体或外来物质）诱导适应性或先天性免疫系统产生免疫反应的能力。对于肽类药物及其杂质而言，免疫原性通常是一种不良副作用，可能会损害药物的疗效和安全性。例如，在 Taspoglutide（一种用于治疗 2 型糖尿病的 GLP-1 受体激动剂）的研发过程中，就出现了严重的免疫原性相关问题。在 3 期临床试验中，25 名参与者出现了类似过敏反应的超敏反应，同时患者还报告了较高的注射部位反应发生率，这不仅导致了患者的不适，还影响了药物的依从性。最终，这些不良反应使得 Taspoglutide 的研发被迫终止。
为了确保仿制药的质量和安全性，美国食品药品监督管理局（FDA）制定了 “简化新药申请”（ANDA）途径。该途径要求申办者识别并表征药物配方中与 RLD 在性质或浓度上不同的工艺相关和产品相关杂质，尤其关注免疫原性问题，并建议使用正交评估方法来证明仿制药在免疫学上与 RLD 等效，从而适合通过 ANDA 途径提交申请。
在此背景下，EpiVax, Inc 的研究人员开展了相关研究。他们致力于开发一系列正交方法，用于评估仿制药肽杂质的免疫原性风险，并将 “PANDA?” 免疫原性风险评估方法提交为 “模型主文件”（MMF）。
研究人员采用了多种关键技术方法。在计算预测模型方面，利用 ISPRI 平台（免疫原性筛选和蛋白质再工程界面）中的 EpiMatrix 和 JanusMatrix 算法进行免疫原性风险评估。EpiMatrix 算法通过将氨基酸序列解析为重叠的 9 聚体框架，评估其与一组 HLA-DR “超型” 等位基因的结合潜力，从而计算出代表免疫原性风险的分数；JanusMatrix 算法则用于识别与人类蛋白质组中保守的 T 细胞表位，评估与自身抗原的同源性，判断免疫耐受性。在体外实验方面，进行了 HLA 结合试验和幼稚 CD4? T 细胞试验。HLA 结合试验用于验证预测的表位与 HLA 的结合情况，通过测量实验肽在不同浓度下对标记控制肽的取代能力，得出 IC??值；幼稚 CD4? T 细胞试验则通过检测幼稚 T 细胞在肽药物和杂质刺激下分化为效应 T 细胞的情况，评估免疫反应的强度和质量。
研究结果如下：
- 免疫原性风险评估模型的准确性：通过与其他工具对比，EpiMatrix 在预测 HLA 结合方面表现出较高的准确性。在对一组 251 个肽的基准分析中，EpiMatrix 的平均预测准确率达到 74%，平均 F?分数为 0.84，均优于行业领先工具 NetMHCIIpan 4.3。
- 体外试验验证免疫原性风险：HLA 结合试验在评估肽与 HLA 的结合亲和力方面具有较高的准确性，在 FDA 资助的两个仿制药研究项目中得到了验证；幼稚 CD4? T 细胞试验能够区分肽药物及其杂质的免疫原性风险，且与计算机预测结果相符，但该试验需要大量新鲜的人类来源细胞，存在一定的局限性。
- 案例研究支持正交方法的有效性：以鲑鱼降钙素（SCT）和特立帕肽（TPT）为例，通过正交方法对其免疫原性风险进行评估，结果表明这些方法能够准确地预测药物及其杂质的免疫原性风险。在 SCT 研究中，EpiMatrix 分析确定了一个在药物免疫原性中起重要作用的表位，HLA 结合研究和 T 细胞试验进一步证实了该表位及相关杂质的免疫原性；在 TPT 研究中，结合 EpiMatrix 和 JanusMatrix 分析，发现一个潜在免疫原性区域与自身抗原具有高度同源性，免疫原性风险较低，且体外试验也验证了这一结论。
研究结论和讨论部分指出，目前对于仿制药肽药物 ANDA 的 T 细胞免疫原性评估尚无标准化方法。研究人员开发的正交方法，虽然存在一定的局限性，如计算机方法依赖训练数据集可能导致偏差，体外试验受样本个体差异影响等，但这些方法为仿制药肽杂质的免疫原性风险评估提供了有效的手段。同时，随着人工智能（AI）和机器学习（ML）技术的不断发展，计算免疫学工具的预测能力将不断提高，有望进一步完善免疫原性风险评估体系。此外，提交的 “PANDA?”MMF 有助于加速仿制药的审批过程，为患者更快地提供所需药物。总之，该研究为仿制药的研发和审批提供了重要的参考依据，对于保障公众的健康具有重要意义。该研究成果发表在《Pharmaceutical Research》上，为该领域的进一步研究奠定了基础。
