靶向 hERG/Eag1 通道：克服胶质母细胞瘤替莫唑胺耐药的新策略

《Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology》：Apoptotic and senolytic effects of hERG/Eag1 channel blockers in combination with temozolomide in human glioblastoma cells

胶质母细胞瘤治疗面临耐药难题，替莫唑胺（TMZ）疗效受限。研究人员开展 hERG/Eag1 通道阻滞剂联合 TMZ 对人胶质母细胞瘤细胞作用的研究。结果显示二者联用可协同促进细胞凋亡、降低细胞衰老水平，为改善治疗提供新方向。

　　在脑肿瘤的 “战场” 上，胶质母细胞瘤（WHO 4 级）堪称最凶悍的 “敌人” 之一，它是成年人中最为常见的恶性脑肿瘤，很多时候毫无征兆地 “突袭” 人体，不少患者甚至没有任何前期临床病史就被它缠上。目前，虽然手术切除、放疗以及与烷化剂替莫唑胺（TMZ）联合的辅助和同期治疗，已经是胶质母细胞瘤治疗的 “标配” 方案，但实际效果却差强人意。TMZ 仅仅能让患者的寿命延长 3 个月，5 年生存率更是只有可怜的 6% ，耐药问题就像一座难以翻越的大山，横亘在医患面前，严重影响着患者的预后，也让现有的治疗手段显得力不从心。所以，寻找新的治疗方法迫在眉睫。

在这样的背景下，德国联邦药物和医疗器械研究所（Federal Institute for Drugs and Medical Devices，BfArM）等机构的研究人员，勇敢地向这座大山发起挑战，开展了一项极具意义的研究。他们的成果发表在《Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology》上，为攻克胶质母细胞瘤耐药难题带来了新的希望。

研究人员主要运用了以下几种关键技术方法：首先是蛋白质免疫印迹法（Western blot），用于检测 hERG 和 Eag1 蛋白的表达；MTT 实验则帮助他们评估细胞的活力，了解药物对细胞的毒性作用；通过 Annexin V / 碘化丙啶（PI）染色结合流式细胞术，能够精准测定细胞的凋亡情况；而利用流式细胞术检测衰老相关 β - 半乳糖苷酶（SA-β -galactosidase）水平，就可以对细胞衰老（CSEN）进行量化分析。

下面来看看具体的研究结果：

1. KCNH 通道的表达分析：研究人员发现，在多种胶质母细胞瘤细胞系（A172、U87、U251、U373）以及原发性胶质母细胞瘤细胞中，hERG 和 Eag1 通道的表达水平相似，并且在患者活检的胶质母细胞瘤组织中也证实了这两种通道的表达。这一结果为后续研究提供了重要基础，说明这些细胞都适合用于进一步探究 hERG/Eag1 通道的作用。
2. hERG/Eag1 通道阻断诱导细胞毒性：使用强效抑制剂阿司咪唑（astemizole）和特非那定（terfenadine）抑制 hERG/Eag1 通道后，研究人员发现这两种药物在低微摩尔浓度（5 - 10 μM 范围）时，就能对胶质母细胞瘤细胞产生细胞毒性。MTT 实验显示，不同细胞系对这两种药物的敏感性有所差异，但总体来说，它们导致细胞死亡的主要原因是诱导细胞凋亡，经检测，凋亡细胞比例超过 70%。
3. 阿司咪唑和特非那定增敏 TMZ 治疗效果：当将阿司咪唑或特非那定与 TMZ 联合使用时，研究人员惊喜地发现，在多种细胞系和原发性胶质母细胞瘤细胞中，MTT 浓度 - 反应曲线向左移动，TMZ 的半数抑制浓度（IC₅₀）值降低，这意味着细胞对 TMZ 的敏感性显著提高。例如，在 U87 和原发性胶质母细胞瘤细胞中，TMZ 的 IC₅₀值大约降低了两倍，说明这两种药物能有效增强 TMZ 的治疗效果。
4. hERG/Eag1 抑制协同增加 TMZ 诱导的细胞凋亡：进一步研究发现，在多数细胞系中，无论是高浓度 TMZ（1 mM）处理 72 小时，还是低浓度 TMZ（50 μM）处理 120 小时，联合使用阿司咪唑或特非那定都能协同增加 TMZ 诱导的细胞凋亡。而且，通过计算药物相互作用系数（CDI）发现，在多个细胞系中 CDI < 1，这明确表明它们之间存在协同效应，能够更有效地促使癌细胞走向凋亡。
5. 阿司咪唑降低 TMZ 诱导的 CSEN：之前的研究表明，TMZ 会诱导胶质母细胞瘤细胞发生 CSEN，而这可能会促进肿瘤的复发和生长。此次研究中，研究人员发现，当同时使用 TMZ 和阿司咪唑时，在 A172 和 LN229 细胞系中，TMZ 诱导的衰老细胞群体显著减少了约 50%，并且 CDI > 1，显示出阿司咪唑对 TMZ 诱导的 CSEN 具有拮抗作用，这为抑制肿瘤复发提供了新的思路。

综合以上研究结果，研究人员得出结论：阻断胶质母细胞瘤中的 hERG/Eag1 通道，是一种极具潜力的策略，有望克服 TMZ 诱导的细胞衰老和耐药问题。不过目前只是初步探索，后续还需要更多的体外和体内研究，进一步明确其作用机制，并在动物模型中验证其疗效，为未来应用于临床治疗奠定坚实基础。

这项研究意义重大，它首次揭示了 hERG/Eag1 通道抑制剂与 TMZ 联合使用的多重优势，为胶质母细胞瘤的治疗开辟了新的方向。虽然距离真正应用于临床还有很长的路要走，但它就像一盏明灯，为后续的研究指引了方向，激励着科研人员继续深入探索，期待有一天能彻底攻克胶质母细胞瘤这一顽疾，给众多患者带来生的希望。