Livin 基因：打破骨肉瘤化疗耐药困境的新希望

《Acta Histochemica》：Silencing Livin gene expression by RNA interference enhanced the chemotherapeutic sensitivity of drug-resistant osteosarcoma cells to doxorubicin

来自南昌大学第二附属医院的研究人员为解决骨肉瘤化疗耐药问题，开展 Livin 基因相关研究，发现沉默 Livin 基因可增强耐药骨肉瘤细胞对阿霉素的化疗敏感性，为治疗提供新依据。

　　骨肉瘤（Osteosarcoma）是儿童和青少年中最常见的恶性肿瘤之一，发生于长骨干骺端，是一种侵袭性恶性肿瘤。尽管有手术和化疗等治疗方法，但骨肉瘤患者的死亡率和致残率仍然很高。随着化疗耐药情况越来越多，寻找新的疗法来提高骨肉瘤的化疗敏感性迫在眉睫。

研究人员在体外通过将人骨肉瘤细胞持续暴露于浓度逐渐增加的阿霉素（doxorubicin）中，建立了耐药的 MG-63 和 U2OS 细胞系。之后，采用 MTT 法测定细胞对阿霉素的耐药指数，利用实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测 Livin mRNA 的转录水平，通过蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测 Livin 蛋白的表达情况。借助基因重组技术，构建了真核表达载体 pSilencer3.1-H₁ neo-Livin，并使用 Lipofectmine 2000 将其转染到耐药的 MG-63 细胞中。再次通过 RT-PCR 和 Western blot 分别测定转染细胞中 Livin mRNA 和蛋白的表达。运用流式细胞术测定细胞周期阶段分布和细胞凋亡情况，采用 MTT 法分析耐药 MG-63 细胞对阿霉素的化疗敏感性。

结果显示，成功构建了重组真核表达载体 pSilencer3.1-H₁ neo-Livin。倒置显微镜下观察到耐药 MG-63 细胞形态不规则且多样。与骨肉瘤细胞相比，耐药骨肉瘤细胞中 Livin mRNA 和蛋白的转录水平有所增加（P＜0.05）。流式细胞术分析表明，转染后的耐药 MG-63 细胞凋亡率更高。与对照组相比，转染后的耐药骨肉瘤细胞中 Livin mRNA 和蛋白的表达均显著降低（P＜0.05）。研究还发现，抑制骨肉瘤细胞中 Livin 的表达可增加其对阿霉素的化疗敏感性。

该研究表明，Livin shRNA 抑制了耐药骨肉瘤细胞的增殖水平，提高了其对阿霉素的敏感性，这意味着 Livin 参与了人类骨肉瘤的耐药过程，有望成为骨肉瘤治疗的潜在靶点。