深静脉血栓形成中中性粒细胞外陷阱的时空动态及其法医学应用研究

《Forensic Science, Medicine and Pathology》：The application of neutrophil extracellular traps to thrombus age Estimation in rat deep vein thrombosis model

为解决深静脉血栓（DVT）形成过程中中性粒细胞外陷阱（NETs）时空动态不明的问题，研究人员开展研究，发现其含量随时间变化，为法医学评估血栓年龄提供新方法，具有重要临床和法医学意义。

　　在深静脉血栓（DVT）的实验模型中，中性粒细胞外陷阱（NETs）已被证实是血栓形成初期的关键介质。通过建立基于染色质的支架结构，NETs为血小板粘附提供了结构基础，并显著促进了静脉内皮细胞损伤的自我放大循环，从而加剧了血栓形成。尽管现有研究主要集中在NETs在DVT启动中的作用，但对于NETs含量在血栓发展各个阶段（包括形成、延长、组织化和再通）的动态变化仍缺乏深入研究。本研究通过建立大鼠时间梯度DVT模型，阐明了NETs在因深静脉血栓引发肺栓塞导致猝死案例中血栓年龄的法医学应用价值。研究使用髓过氧化物酶（MPO）抗体（一种成熟的中性粒细胞激活标志物）和组蛋白CitH3抗体（NETs的特异性标志物），进行了双重免疫荧光共定位研究，证实了NETs在血栓形成过程中的关键作用。此外，Western blot分析显示血栓团块中NETs含量随时间变化。CitH3水平在结扎后最初3-6小时内无显著升高，24小时后逐渐增加，第3天达到最大表达，随后逐渐下降，至第21天完全消失。在不同时间点对阳性细胞计数（×1000，取五个代表性视野）进行定量分析，发现3小时至1天内，MPO阳性细胞数量显著增加，而CitH3阳性细胞增加较慢。到第3天，MPO水平开始下降，最终低于CitH3水平。对CitH3/MPO比值的分析具有重要的法医学意义。研究结果表明，CitH3/MPO比值接近1.0时，血栓形成时间在5天以内。比值变化程度可作为时间指标：变化较小（接近1.0）表明血栓形成时间较短；比值超过2.0或变化较大则表明血栓形成时间超过7天。