高通量筛选富含DHA的Aurantiochytrium菌株新方法：基于SPV反应的研究突破

《AMB Express》：Sulfo-phospho-vanillin method for screening Aurantiochytrium strains with high docosahexaenoic acid levels

本研究针对商业生产DHA面临的高成本和筛选高产菌株难题，开发了一种基于SPV反应的高通量筛选方法，成功筛选出7株高SPV反应菌株，其中4株经GC-MS验证DHA含量显著提高，为DHA的可持续生产提供了新策略。

　　DHA（二十二碳六烯酸）是一种重要的ω-3多不饱和脂肪酸，对大脑和视网膜发育至关重要。然而，其商业生产面临高成本和筛选高产菌株的挑战。为了突破这一瓶颈，台湾成功大学的研究人员开发了一种基于SPV反应的高通量筛选平台，用于快速识别富含DHA的Aurantiochytrium菌株。该研究不仅成功筛选出高产DHA的突变株，还为DHA的可持续生产提供了新的思路，研究成果发表在《AMB Express》上。

在研究中，研究人员首先通过UV诱变技术对Aurantiochytrium limacinum菌株BL10进行处理，获得了200株突变株。随后，利用优化的SPV反应条件对这些突变株进行高通量筛选，发现7株突变株的SPV反应显著高于原始菌株（P<0.01）。进一步的GC-MS分析验证了其中4株突变株的DHA含量显著提高。这一结果表明，SPV反应可以作为一种有效的高通量筛选工具，用于快速识别富含DHA的Aurantiochytrium菌株。

在研究方法方面，研究人员首先对BL10菌株进行UV诱变处理，通过控制UV照射时间（5秒）获得60%-80%的致死率，从而获得突变株。接着，通过优化SPV反应条件（如样本体积和是否去除水分），确定了15 μL样本量且不进行水去除的条件为最佳。在此基础上，对200株突变株进行SPV反应分析，筛选出高SPV反应的菌株，并通过GC-MS进行DHA含量验证。

研究结果表明，通过SPV反应筛选出的7株突变株中，4株的DHA含量显著高于原始菌株。其中，M137、M142、M144和M183株的DHA水平显著提高，而M137和M183株的n-6 DPA（二十二碳五烯酸）含量也显著增加。此外，研究还发现SPV反应值与DHA/DPA含量之间存在一定的相关性，但SPV反应倾向于高估DHA/DPA含量，这可能是由于其他不饱和脂肪酸或由UV辐射诱导的化合物（如角鲨烯）的存在。

在讨论部分，研究人员指出，尽管SPV反应在高通量筛选中表现出高效性，但也存在一定的局限性，如特异性较低，无法区分DHA与其他多不饱和脂肪酸，且可能受到含有C=C双键的干扰化合物（如角鲨烯和类胡萝卜素）的影响。然而，通过适当的样本稀释、设置对照以及结合其他分析方法（如GC-MS）进行验证，可以有效降低假阳性结果的可能性。此外，样本制备过程中的关键步骤（如控制反应温度、避免光照和氧化等）对于保持脂肪酸的完整性至关重要。尽管存在这些局限性，SPV反应作为一种高通量筛选方法，仍具有显著的时间、精力和成本优势，能够在短时间内筛选大量突变株，为DHA的可持续生产提供了有力的技术支持。

综上所述，该研究开发的基于SPV反应的高通量筛选方法为Aurantiochytrium菌株的快速筛选提供了一种高效、低成本的解决方案，有助于推动DHA的可持续生产和商业化应用。这一成果不仅为海洋微生物资源的开发利用提供了新的思路，也为相关领域的研究提供了重要的参考价值。