DAP12相关合成抗原受体：实现T细胞多靶向治疗的新策略

《iScience》：DAP12-associated synthetic antigen receptors enable multi-targeting of T cells with independent chimeric receptors in a small genetic payload

本研究聚焦于解决实体瘤治疗中抗原异质性导致的肿瘤逃逸问题，研究人员开发了一种基于DAP12相关合成抗原受体（DAP12-SAR）的T细胞多靶向策略，成功实现了在较小遗传负荷下对多种肿瘤抗原的同时靶向，为克服肿瘤逃逸提供了新思路。

　　在癌症治疗领域，T细胞疗法为血液系统恶性肿瘤带来了突破性进展，但在实体瘤治疗中仍面临诸多挑战，其中肿瘤抗原的异质性是关键难题之一。实体瘤往往缺乏广泛表达的可靶向抗原，这使得单一靶点的T细胞疗法难以取得理想效果。为了解决这一问题，加拿大麦克马斯特大学（McMaster University）的研究人员开展了一项创新性研究，探索利用DAP12相关合成抗原受体（DAP12-associated synthetic antigen receptors，DAP12-SAR）实现T细胞多靶向治疗的可行性，研究成果发表在《iScience》杂志上。

在该研究中，研究人员首先设计了一系列DAP12相关受体，这些受体具有较短的胞外铰链区和胞内结构域，并且可以与同一胞内信号模块DAP12组装。通过将激活受体（如KIR2DS2和TREM1）的胞外结构域截短并替换为肿瘤靶向结构域，赋予了T细胞对特定抗原的特异性识别能力。实验结果显示，当两种DAP12相关合成受体共表达于T细胞时，虽然受体表面水平较单受体表达时有所降低，但这一现象并未影响T细胞的激活，只是对早期信号事件和细胞因子产生有一定影响。通过增加合成受体水平，研究人员成功克服了功能缺陷，证实了在单个T细胞中共表达多个DAP12相关合成受体的可行性。

为了进一步验证该策略的多靶向能力，研究人员构建了针对不同抗原组合的双受体系统。例如，他们设计了同时靶向IL13Ra2和HER2的双受体T细胞，以及靶向CD133和HER2的双受体T细胞。实验表明，这些双受体T细胞能够独立识别两种抗原，并在体外展现出对肿瘤细胞的高效杀伤能力。此外，研究人员还发现，当两种靶点均存在于肿瘤细胞上时，双受体T细胞的细胞毒性与单个更有效的受体相当；而在仅有一种靶点存在的情况下，双受体T细胞与单受体T细胞的细胞毒性差异不大。然而，在细胞因子产生方面，双受体T细胞表现出一定的减弱趋势，但通过增加受体表达水平，这种功能缺陷得到了显著改善。

在实验方法方面，研究人员采用了多种关键的技术手段。他们利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建了多种抗原敲除（KO）细胞系，用于评估T细胞受体的特异性。通过流式细胞术检测受体的表面表达水平，并利用共培养实验评估T细胞的细胞毒性。此外，研究人员还采用了定量流式细胞术来精确测量受体和DAP12的表达比例，以及通过细胞增殖实验和细胞因子分析来评估T细胞的功能。

研究结果表明，DAP12-SAR平台具有高度的灵活性和广泛的适用性，可以针对多种靶点和结合域格式进行设计。研究人员通过优化受体结构和表达策略，成功实现了在较小遗传负荷下对多种肿瘤抗原的同时靶向。这一成果不仅为克服肿瘤抗原逃逸提供了新的策略，也为开发针对实体瘤的T细胞疗法开辟了新的途径。然而，研究也存在一定的局限性，例如在受体表达水平和功能方面仍需进一步优化，且在临床应用前还需进行更多的实验验证。尽管如此，该研究为未来癌症治疗领域的发展提供了重要的理论基础和实践指导，有望推动T细胞疗法在实体瘤治疗中的广泛应用。