靶向中间神经元的 SCN1A 基因替代疗法：治疗 Dravet 综合征的新希望

《Science Translational Medicine》：Interneuron-specific dual-AAV SCN1A gene replacement corrects epileptic phenotypes in mouse models of Dravet syndrome

研究人员开发出针对 Dravet 综合征（DS）的中间神经元特异性基因替代疗法，在小鼠模型中效果良好，或可用于临床。

　　Dravet 综合征（DS）是一种严重且难治的癫痫综合征，通常由编码电压门控钠通道 1.1（Na_V1.1）的 SCN1A 基因功能缺失突变引起，导致中间神经元抑制功能障碍。Mich 及其同事开发了一种针对 DS 的基因替代疗法，专门针对这些中间神经元。他们将 SCN1A 基因分成两半，以适配腺相关病毒（AAV）衣壳，并利用分裂内含肽技术在翻译后将两半重新组装成完整的 Na_V1.1 蛋白。在添加先前开发的增强子技术使 SCN1A 基因靶向在中间神经元中表达后，他们在两种 DS 小鼠模型上测试了双 AAV 系统，结果显示该疗法改善了出生后的死亡率，并减少了热性和自发性癫痫发作。这些研究为进一步探究针对中间神经元的基因疗法治疗 DS 患者提供了支持。

Dravet 综合征（DS）是一种严重的发育性癫痫性脑病，特征为药物难治性癫痫发作、发育迟缓、智力障碍、运动功能缺陷，还有 10% 至 20% 的过早死亡率。大多数 DS 患者的 SCN1A 基因一个拷贝存在功能缺失突变，该基因编码电压门控钠通道（Na_V）1.1α 亚基，且与抑制性神经元功能障碍有关。研究人员生成了 SCN1A 的分裂内含肽形式，并采用双载体递送方法克服腺相关病毒（AAV）的包装限制。此外，他们应用先前开发的增强子技术，产生了一种针对 DS 的中间神经元特异性基因替代疗法，称为 DLX2.0-SCN1A。分裂内含肽形式的 SCN1A 载体可产生全长 Na_V1.1 蛋白，并且在体外 HEK293 细胞中记录到了功能性钠通道。将双 DLX2.0-SCN1A AAVs 给予野生型小鼠后，通过蛋白质免疫印迹检测到产生了全长的重组人蛋白，通过免疫组织化学检测到在端脑中间神经元特异性且呈剂量依赖性的 Na_V1.1 表达。这些载体还在 Scn1a^fl/+;Meox2-Cre 和 Scn1a^+/R613X DS 小鼠模型中，对出生后的死亡率和癫痫发作提供了强烈的剂量依赖性保护。向野生型小鼠注射单或双 DLX2.0-SCN1A AAVs，通过免疫组织化学检测，未发现死亡率增加、体重减轻或胶质细胞增生。相反，由人 SYNAPSIN I 启动子驱动的 SCN1A 在所有神经元中的表达，会在疾病发作前的断奶前期产生不良影响，表现为死亡率增加。这些发现证明了中间神经元特异性 AAV 介导的 SCN1A 基因替代疗法可在小鼠模型中挽救 DS 表型的概念，表明它可能是 DS 患者的一种治疗方法。