肿瘤治疗新突破：靶向 CCR7 的 TC6-D3 肽抑制肿瘤细胞淋巴结转移

《Cancer Immunology, Immunotherapy》：A novel peptide targeting CCR7 inhibits tumor cell lymph node metastasis

为抑制肿瘤细胞淋巴结转移，研究人员筛选出 TC6-D3 肽，其可阻断 CCR7 通路，增强抗肿瘤免疫。

　　肿瘤，一直是威胁人类健康的重大难题，其中肿瘤细胞的转移更是让治疗雪上加霜。淋巴结（LN）作为肿瘤细胞最常见的转移部位之一，与患者预后密切相关。大量研究发现，肿瘤细胞转移到淋巴结后，会诱导肿瘤特异性免疫耐受，使得远处组织更易被肿瘤细胞定植，这大大增加了肿瘤治疗的难度。同时，肿瘤细胞还会通过改变代谢途径和表型来逃避淋巴结内的免疫监视。在众多与肿瘤转移相关的因素中，趋化因子受体 7（CCR7）备受关注。CCR7 与 C-C 趋化因子配体 19/21（CCL19/CCL21）结合，在肿瘤细胞向淋巴结的迁移过程中发挥着关键作用。已有研究表明，CCR7 高表达与多种肿瘤的不良预后相关，因此，靶向 CCR7 成为抑制肿瘤淋巴结转移的潜在有效策略。

在此背景下，中山大学药学院（深圳）等研究机构的研究人员开展了相关研究，其成果发表在《Cancer Immunology, Immunotherapy》上。该研究成功筛选并开发出一种靶向 CCR7 的 TC6-D3 肽，为肿瘤治疗带来了新的希望。

研究人员为开展此项研究，运用了多种关键技术方法。首先，利用噬菌体展示技术筛选出与 CCR7 结合的肽；接着，通过分子对接研究肽与 CCR7 的相互作用模式；此外，构建小鼠腘窝淋巴结转移模型，直观观察肿瘤细胞的转移情况；最后，运用流式细胞术分析免疫细胞的变化，以此来评估 TC6-D3 肽对肿瘤转移和免疫反应的影响。

研究结果如下：

1. CCR7 表达与淋巴结转移的相关性：研究人员通过分析 GEO 和 TCGA 数据集发现，CCR7 在有淋巴结转移的肿瘤中高表达，在原发性肿瘤中表达较低，且在皮肤黑色素瘤（SKCM）的淋巴结转移组织中 CCR7 表达最高。同时，与远处转移的肿瘤相比，淋巴结转移组织中负性免疫检查点蛋白，如程序性死亡配体 1（PD-L1）、程序性死亡受体 1（PD-1）、淋巴细胞激活基因 3（LAG-3）和 T 细胞免疫球蛋白黏蛋白分子 3（TIM-3）显著升高。这表明 CCR7 不仅介导肿瘤淋巴转移，还通过上调这些免疫检查点蛋白抑制 CD8?T 细胞的激活，促进淋巴结定植和肿瘤免疫耐受，进而推动远处转移。此外，研究人员构建了 B16-CCR7 和 MC38-CCR7（GFP）细胞系，并建立了腘窝淋巴结转移模型，验证了 CCR7 在肿瘤转移中的关键作用。
2. CCR7 肽的筛选：研究人员通过噬菌体展示生物淘选技术，筛选出 6 种靶向 CCR7 的候选肽，其中 TC6 肽对 CCR7/CCL19 和 CCR7/CCL21 相互作用的干扰效果最强，且呈剂量依赖性。通过丙氨酸扫描确定了 TC6 肽中各氨基酸残基对其阻断活性的贡献，分子对接显示 TC6 肽的部分氨基酸残基与 CCR7 细胞外结构域口袋中的氨基酸残基相互作用。
3. 增强 TC6 肽的稳定性：由于 L - 肽易被蛋白酶降解，稳定性差，研究人员用 D - 氨基酸取代 TC6 肽 N 端和 C 端的氨基酸，得到 TC6-D3 肽。实验表明，TC6-D3 肽保留了对 CCR7/CCL19 相互作用的阻断活性，且在小鼠血清中表现出更强的抗水解能力，其与 mCCR7-EGFP 融合蛋白的解离常数为 403nM，对 MC38-CCR7（GFP）细胞的增殖无明显抑制作用，具有较高的生物学稳定性和安全性。
4. TC6-D3 对 ERK1/2 磷酸化的影响：已知 CCR7 与 CCL19 或 CCL21 结合可激活 ERK1/2 通路，介导肿瘤细胞的迁移和侵袭。Transwell 迁移实验和蛋白质免疫印迹（Western blot）分析表明，TC6-D3 肽可显著抑制 MC38-CCR7（GFP）细胞和 B16-CCR7 细胞中 CCL19 或 CCL21 诱导的 ERK1/2 磷酸化，从而抑制肿瘤细胞的迁移。
5. TC6-D3 的序列特异性：合成的乱序对照肽与 CCR7 蛋白无亲和力，对 CCL19 与 CCR7 的结合无明显干扰，对 MC38-CCR7（GFP）细胞的趋化迁移和 ERK1/2 磷酸化也无显著影响，而 TC6-D3 肽则表现出明显的抑制作用，这证明了 TC6-D3 肽的生物学活性具有序列特异性。
6. TC6-D3 减轻淋巴结肿瘤负担：在小鼠腘窝淋巴结转移模型中，给予 TC6-D3 肽治疗后，肿瘤生长减缓，高剂量组（6mg/kg）的抗肿瘤活性更显著，且不影响小鼠体重。IVIS 成像和流式细胞术分析显示，TC6-D3 肽可显著抑制肿瘤细胞向腘窝淋巴结的转移，但对腹股沟淋巴结的转移影响不明显。
7. TC6-D3 恢复 T 细胞介导的抗肿瘤免疫：TC6-D3 肽治疗后，原发性足垫肿瘤中肿瘤浸润 CD8?T 细胞和分泌细胞毒性干扰素 -γ（IFN-γ）的 CD8?T 细胞比例增加，高剂量组更为明显。同时，在腘窝淋巴结和腹股沟淋巴结中，分泌 IFN-γ 的 CD8?T 细胞数量也显著增加，这表明 TC6-D3 肽可诱导全身免疫反应，恢复 T 细胞的抗肿瘤活性。
8. TC6-D3 无明显免疫相关副作用：研究人员探究了 TC6-D3 肽对免疫细胞迁移的影响，发现其对肿瘤、腘窝淋巴结和腹股沟淋巴结中总树突状细胞（DCs）和 CCR7?DCs 亚群的比例无显著影响，对 CCR7?CD8?和 CCR7?CD4?T 细胞的浸润也无明显影响。此外，血清生化指标检测和主要器官的组织病理学分析表明，TC6-D3 肽无明显免疫相关副作用。

研究结论和讨论部分指出，淋巴结转移是肿瘤预后不良的重要指标，CCR7 在多种肿瘤的淋巴结转移中发挥关键作用。阻断 CCR7 轴可有效抑制淋巴结转移，减轻淋巴结负担，恢复功能失调的 T 细胞。TC6-D3 肽通过特异性阻断 CCR7/CCL19 和 CCR7/CCL21 相互作用，抑制肿瘤细胞迁移，延缓肿瘤进展，增强 T 细胞的抗肿瘤疗效。虽然 TC6-D3 肽在抑制肿瘤转移方面展现出潜力，但仍存在一些局限性，如对免疫细胞功能的影响尚未完全明确，其与 CCR7 的结合模式也需进一步通过蛋白质结晶验证。未来的研究可致力于开发能选择性结合肿瘤表达的 CCR7 的递送系统，以更精准地抑制淋巴结转移，同时避免对免疫细胞和抗肿瘤免疫反应的影响。总之，该研究为肿瘤淋巴结转移的治疗提供了新的策略和潜在的治疗靶点，具有重要的临床应用价值。