野生反刍动物源蒙氏肠球菌的安全性与益生潜力研究

《Veterinary Research Communications》：Fecal strains Enterococcus mundtii from wild ruminants, their safety and postbiotic potential

为探究野生反刍动物肠道微生物影响，研究人员对蒙氏肠球菌（E. mundtii）展开研究，发现其有安全及益生潜力。

　　在欧洲的森林和农业区域，生活着众多野生反刍动物，比如狍（Capreolus capreolus）和马鹿（Cervus elaphus）。这些动物的肠道微生物群是一个复杂的微生态系统，对其健康有着至关重要的影响。不同因素，像栖息地、季节、年龄，甚至饮食，都在塑造肠道微生物群的结构和功能中发挥作用。其中，肠球菌属在红鹿粪便中有着较高的丰度。

过去，肠球菌由于携带抗生素抗性基因或其他毒力因子基因，常被视为机会致病菌。然而，近年来的研究表明，特定的肠球菌，如蒙氏肠球菌，可能具有对动物和人类有益的特性。蒙氏肠球菌能产生肠球菌素（enterocins，一种抗菌蛋白质类物质，也属于后生元 postbiotics），可用于预防乳腺炎。因此，深入研究蒙氏肠球菌，挖掘其潜在价值，对保障动物和人类健康意义重大。

来自斯洛伐克科学院生物科学中心动物生理学研究所等机构的研究人员，针对从波兰狍和马鹿粪便中分离出的蒙氏肠球菌展开了研究。该研究成果发表在《Veterinary Research Communications》上。

研究人员采用了多种关键技术方法。首先，通过采集野生反刍动物的粪便样本获取研究对象。之后，运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）和 16S rRNA 基因测序技术对菌株进行分类鉴定；利用 API ZYM 系统检测酶活性；采用纸片扩散法测定抗生素敏感性；通过定量平板试验分析生物膜形成能力；借助多种实验评估菌株的安全性，包括溶血、核酸酶和明胶酶活性检测以及毒力因子基因测定；还运用定性和定量方法检测蒙氏肠球菌的后生元潜力。

菌株分类学

研究人员利用 MALDI-TOF 质谱技术，将七株菌株鉴定为蒙氏肠球菌，其中六株来自狍粪便，一株来自马鹿粪便。部分菌株的评估得分显示其属的鉴定可靠、种的鉴定可能性较高，而另外一些菌株得分对应可能的属鉴定。不过，通过下一代测序方法（BLASTn 分析），所有菌株的 16S rRNA 序列都与蒙氏肠球菌具有高度同一性，最高可达 100%。这表明两种方法相互印证，准确确定了菌株的分类地位。

体外安全性评估

实验结果显示，这些菌株脱氧核糖核酸酶（DNase）呈阴性，多数菌株具有 β - 溶血活性，少数表现出 α - 溶血活性。六株菌株具有低水平的生物膜形成能力，而菌株 EM 6/123/1 不形成生物膜。在抗生素敏感性方面，蒙氏肠球菌对大多数测试抗生素敏感，仅对链霉素和卡那霉素耐药。同时，未检测到这些菌株产生诸如胰蛋白酶、α - 糜蛋白酶和 β - 葡萄糖醛酸酶等有害酶，也未发现所检测的毒力因子基因，并且没有菌株表现出明胶酶活性。这一系列结果表明，这些蒙氏肠球菌菌株的安全性较高。

有益后生元潜力

研究人员对蒙氏肠球菌的后生元潜力进行了测试。结果发现，不同菌株产生的物质对指示菌株的抑制效果各异。其中，菌株 EM 1/90/2 产生的物质抑制效果最为显著，可抑制 48% 的指示菌株生长，对肠球菌、葡萄球菌和李斯特菌的抑制率分别高达 86%、24% 和 33% 。菌株 EM 6/123/1 产生的物质虽然抑制率略低，但在 -20℃储存一个月后仍保持活性。通过定量检测，发现菌株 EM 1/90/2 产生的物质抑制活性最高，可达 1600 AU/mL，但该物质在 -20℃储存一个月后失活；而菌株 EM 6/123/1 产生的物质抑制活性为 400 AU/mL，在 -20℃储存一个月后仍有 100 AU/mL 的活性。

综合研究结果与讨论，研究人员从野生反刍动物粪便中成功鉴定出七株蒙氏肠球菌。这些菌株因缺乏毒力因子且生物膜形成能力低，具有安全特性，同时其产生的细菌素物质表现出后生元潜力，对指示菌株生长的抑制率最高可达 48% 。其中，菌株 EM 1/90/2 产生的物质后生元活性最强，菌株 EM 6/123/1 产生的物质在 -20℃储存一个月后仍保持活性。该研究为蒙氏肠球菌在动物和人类健康领域的应用提供了重要的理论依据，后续可进一步深入研究其具体的应用方式和效果，有望为相关疾病的预防和治疗开辟新的途径。