5 - 氮杂胞苷（5Aza）防治椎间盘退变新策略：调控 PPARγ 甲基化

为探究 5Aza 对 IL-1β 诱导的髓核（NP）细胞凋亡及内质网应激（ERS）的影响，研究发现其可防治疗椎间盘退变（IDD）。

　　腰痛（LBP）是椎间盘退变（IDD）的常见症状，然而，IDD 的发病机制尚未完全明确。多项研究表明，IDD 患者存在 DNA 甲基化异常改变。5 - 氮杂胞苷（5Aza）是一种基于核苷的 DNA 甲基转移酶抑制剂，能够抑制 DNA 甲基化。因此，本研究旨在探究 5Aza 是否可以通过抑制过氧化物酶体增殖物激活受体 γ（PPARγ）甲基化，改善白细胞介素 - 1β（IL-1β）诱导的髓核（NP）细胞凋亡和内质网应激（ERS），并探讨其潜在发病机制。研究运用细胞计数试剂盒 - 8（CCK-8）检测 NP 细胞活力；采用甲基化特异性 PCR（MSP）评估 DNA 甲基化水平；利用 TUNEL 法检测 NP 细胞凋亡情况；通过蛋白质免疫印迹法（Western blot）测定 DNA 甲基转移酶 1（DNMT1）、DNA 甲基转移酶 3a（DNMT3a）、PPARγ 蛋白的表达水平，以及 ERS 相关指标（CCAAT 增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、葡萄糖调节蛋白 78（GRP78）、激活转录因子 6（ATF-6））和细胞凋亡相关指标（B 细胞淋巴瘤 - 2（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）、半胱天冬酶 - 3（Caspase-3））的蛋白表达水平。结果显示，5Aza 可通过修饰 PPARγ 启动子的甲基化，抑制 DNMT1 和 DNMT3a 的表达，促进 PPARγ 表达。Western blot（检测 Bcl-2、Bax、Caspase-3、CHOP、GRP78、ATF-6）、TUNEL 以及 CHOP 免疫荧光结果表明，5Aza 减轻了 IL-1β 诱导的 NP 细胞凋亡和 ERS。当用 PPARγ 抑制剂（T0070907）预处理后，5Aza 对 IL-1β 诱导的 NP 细胞凋亡和 ERS 的保护作用减弱，这表明 5Aza 通过促进 PPARγ 表达，抑制 IL-1β 诱导的 NP 细胞凋亡和 ERS。5Aza 通过抑制 DNMT1/DNMT3a 的表达来维持 PPARγ 水平，从而显著减轻 IL-1β 对 NP 细胞的损伤。研究结果提示，通过 DNA 去甲基化维持 PPARγ 水平，可能是预防或治疗 IDD 的一种有效策略。