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为探究水稻抗稻瘟病机制,研究人员对比迪屯 502 和 506 转录组与基因组,发现关键基因及 SNP 作用。
稻瘟病是水稻种植中的 “头号杀手”,由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起,全球每年因它导致的水稻减产超过 30% ,严重威胁着全球粮食安全。水稻作为亚洲国家的主食,为全球半数以上人口提供能量,其产量和质量至关重要。
多年来,科研人员一直致力于研究水稻与稻瘟病菌的相互作用,虽有成果,但稻瘟病菌不断变异,新的水稻品种常因病菌侵害而减产。比如,一些原本具有抗性的水稻品种,种植几年后就失去了对稻瘟病菌的抵抗力。因此,挖掘新的水稻抗稻瘟病基因,探索其抗病机制迫在眉睫。
为了解决这些问题,云南农业大学的研究人员开展了一项极具意义的研究。他们以迪屯 502(D502)这个云南重要的水稻品种及其衍生的抗稻瘟病品种迪屯 506(D506)为研究对象,通过比较转录组和基因组分析,深入探究水稻的抗病机制。该研究成果发表在《BMC Plant Biology》上。
研究人员主要运用了以下关键技术方法:一是高通量 RNA 测序(RNA-Seq),用于获取受稻瘟病菌感染后 D502 和 D506 叶片的转录本信息;二是基因组测序,测定两个品种的基因组序列,分析基因差异;三是生物信息学分析,包括差异表达基因(DEGs)分析、基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析、蛋白质 - 蛋白质相互作用网络分析等,挖掘基因功能和潜在的抗病机制。
研究结果如下:
- 迪屯 502 和迪屯 506 幼苗对稻瘟病菌的响应:接种 13 种稻瘟病菌株 7 天后,发现 D502 对几乎所有菌株都高度易感,病斑评分在 3 - 5,疾病指数(DI)范围为 25.05 - 78.88;而 D506 表现出高抗性,仅 YN541 菌株使 D506 出现 3 - 4 级病斑,DI 范围为 4.33 - 30,表明 D506 对多数稻瘟病菌株有明显抗性。
- 差异表达基因(DEGs)的高通量 RNA - seq 分析:RNA - seq 产生了大量可靠数据。主成分分析(PCA)和层次聚类分析显示,稻瘟病菌感染后,D502 转录变化明显,而 D506 在 48 小时时转录变化较小。在不同时间点,D502 和 D506 分别鉴定出不同数量的 DEGs,且二者相似的 DEGs 占比不高。
- 易感和抗性品种中 DEGs 的功能注释分析:GO 和 KEGG 通路分析表明,在抗性品种 D506 中,上调的 DEGs 在核糖体生物发生等过程显著富集;而在易感品种 D502 中,许多 DEGs 在植物激素信号转导、淀粉和蔗糖代谢等途径下调,这些变化可能导致 D502 抗性丧失。
- DEGs 在 KEGG 通路中的表达:分析多个 KEGG 通路相关基因发现,在核糖体和核糖体生物发生通路中,D506 有较多基因上调;在植物激素信号转导、淀粉和蔗糖代谢等通路中,D502 有大量基因下调,这些下调基因可能参与削弱宿主对稻瘟病菌的防御反应。
- D502 和 D506 中 DEGs 在不同时间进程的表达谱:通过 mRNA - seq 分析,发现 cluster 3 基因在 D506 中高表达,其功能主要与植物防御反应、代谢途径等相关,进一步证明 D506 在应对稻瘟病菌感染时激活了防御相关基因。
- DEGs 的蛋白质 - 蛋白质相互作用网络分析:PPI 网络分析显示,D506 的网络相互作用复杂性在感染后增加,而 D502 降低。功能富集分析表明,D506 中 DEGs 参与更多防御和酶相关的 GO 和 KEGG 通路,这可能是其具有抗性的原因之一。
- DEGs 参与 PTI 和 ETI 信号通路:研究发现 D506 中有许多 DEGs,包括 P450 细胞色素、转录因子(TFs)等,可能参与模式触发免疫(PTI)和效应子触发免疫(ETI)信号通路,激活对稻瘟病菌的免疫反应,增强抗病性。
- 易感和抗性品种之间的基因组分析:对两个品种基因组测序发现,D506 的平均基因组覆盖度更高。大量 SNP 存在于基因间区域,且非同义单核苷酸多态性(nsSNPs)在两个品种中都较多。功能注释显示,D502 中携带 nsSNPs 的基因多与防御和免疫相关通路有关,但多为下调,而 D506 中相关基因较少。
- 携带 nsSNPs 的基因鉴定及其功能分析:基于 nsSNPs 分析,鉴定出 D502 和 D506 中携带不同 nsSNPs 的基因。功能富集分析表明,D502 中这些基因多与易感性相关,而 D506 中四个基因(WAK1、WAK4、WAK5 和 OsDja9)携带 nsSNPs 且上调表达,可能与抗病性有关。
- 联合转录组和基因组分析揭示迪屯 506 的抗性:联合分析发现,D506 中特有的 4 个基因(WAK1、WAK4、WAK5 和 OsDja9)携带 nsSNPs 且上调表达。这些基因的 nsSNPs 导致氨基酸变异,改变蛋白质结构,可能使其在 D506 中发挥抗病作用。
研究结论和讨论部分指出,本研究通过多组学方法揭示了 D502 和 D506 对稻瘟病菌感染的不同响应机制。发现的 4 个防御和抗病基因在 D506 中高表达且携带 nsSNPs,可能参与增强 D506 对稻瘟病菌的抗性。这些发现为水稻分子育种提供了重要的遗传资源,有助于培育更具抗性的水稻品种,对农业生产中稻瘟病的防治具有重要意义,为解决全球粮食安全问题提供了新的思路和方向 。
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