MS275 联合抗 PD-1 免疫疗法：结直肠癌治疗新希望

　　在癌症治疗领域，结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）是个 “狠角色”。它不仅是全球第三大常见癌症，还是癌症相关死亡的 “第三大杀手”。随着生活方式的改变和人口老龄化加剧，结直肠癌的发病率逐年攀升，给全球的医疗健康体系带来了沉重的负担。目前，结直肠癌的治疗方法包括手术、化疗、放疗和靶向治疗等，但对于晚期患者，这些传统治疗手段的效果往往不尽如人意，患者的生存率和生活质量亟待提高。

在寻找更有效的治疗方案过程中，组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histone Deacetylase Inhibitors，HDACi）成为了研究的焦点之一。HDACi 能够通过调节组蛋白的乙酰化状态，影响基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长、诱导细胞凋亡。MS275（Entinostat）作为一种 I 类 HDACi，选择性地靶向 HDAC1、HDAC2 和 HDAC3，在体外实验中对多种实体瘤展现出了一定的抗肿瘤活性，尤其是在结直肠癌和乳腺癌方面，显示出了潜在的治疗价值。然而，令人遗憾的是，MS275 在临床试验中的表现却差强人意，单药治疗的效果有限，这背后的原因一直困扰着科研人员。

为了揭开这一谜团，探寻增强 MS275 抗结直肠癌效果的方法，四川大学华西基础医学与法医学院以及华西医院的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Cancer Immunology, Immunotherapy》杂志上，为结直肠癌的治疗带来了新的希望。

在本次研究中，研究人员采用了多种技术方法。细胞实验方面，运用 MTS 实验检测细胞活力、BrdU 染色评估细胞增殖、Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒分析细胞凋亡，从多个角度探究 MS275 对结直肠癌细胞的作用。在动物实验中，构建了 AOM-DSS 结直肠癌小鼠模型和原位结直肠癌模型，以观察 MS275 在体内的抗肿瘤效果；同时，通过免疫组化（IHC）染色分析肿瘤浸润免疫细胞，ELISA 测定细胞因子浓度，流式细胞术检测细胞表面标志物，深入研究 MS275 对肿瘤免疫微环境的影响。此外，还利用 RNA 提取、RT-qPCR 和 Western blotting 技术检测相关基因和蛋白的表达水平，进一步探究 MS275 作用的分子机制。

研究结果显示：

• MS275 抑制结直肠癌细胞增殖并诱导凋亡：MS275 处理结直肠癌细胞 48 小时后，蛋白的泛乙酰化水平显著增加，且呈剂量依赖性地降低细胞内 HDAC3 蛋白表达水平。对不同 KRAS 突变状态的细胞系研究发现，MS275 抑制细胞增殖的作用与 KRAS 基因突变状态无关，同时，它还能诱导细胞凋亡，且凋亡诱导作用呈剂量依赖性，在多种结直肠癌细胞系中均得到验证。
• MS275 在体内具有一定抗肿瘤活性，但效果不如体外：在 AOM-DSS 结直肠癌小鼠模型中，MS275 治疗后结肠肿瘤数量有所减少，但肿瘤总体大小无明显变化；在原位结直肠癌模型中，MS275 治疗显著抑制了肿瘤生长，且在免疫缺陷小鼠中的抑制效果比免疫健全小鼠更明显，表明 MS275 在体内的抗肿瘤效果受到免疫系统的影响。
• MS275 治疗抑制肿瘤免疫微环境：通过对 AOM-DSS 结直肠癌肿瘤模型的研究发现，MS275 处理后，肿瘤浸润的 CD3⁺T 细胞、CD8⁺T 细胞数量减少，F4/80 阳性细胞增多；同时，肠系膜淋巴结（MLNs）中促炎细胞因子 TNF-α 和 IFN-γ 上调，CD3⁺CD4⁺T 细胞比例增加，CD3⁺CD8⁺T 细胞比例下降，这些变化共同营造了一个免疫抑制的肿瘤微环境。
• MS275 上调结直肠癌中 PD-L1 的表达：无论是在体外培养的结直肠癌细胞，还是在 AOM-DSS 结直肠癌模型的肿瘤组织中，MS275 处理后均能显著上调 PD-L1 在 mRNA 和蛋白水平的表达。进一步研究发现，这种上调作用与 HDAC3 表达降低密切相关。
• MS275 与抗 PD-1 抗体联合治疗增强抗肿瘤效果：在 AOM-DSS 结直肠癌模型小鼠中，MS275 与抗 PD-1 单克隆抗体联合治疗 3 周后，与单独使用 MS275 或抗 PD-1 单克隆抗体相比，联合治疗显著抑制了肿瘤生长，减少了肿瘤数量和体积，同时促进了肿瘤细胞凋亡，抑制了细胞增殖，增加了肿瘤浸润的 CD3⁺T 细胞和 CD8⁺T 细胞数量，改变了肠系膜淋巴结中 CD4⁺T 细胞和 CD8⁺T 细胞的比例，增强了抗肿瘤免疫反应。
• STAT3 激活是 MS275 上调结直肠癌细胞中 PD-L1 的关键：研究表明，MS275 可显著上调结直肠癌细胞系和结直肠癌小鼠模型中磷酸化 STAT3 蛋白的表达水平，且 PD-L1 表达随 STAT3 磷酸化水平的变化而变化。使用 STAT3 抑制剂 Stattic 处理后，可抑制 MS275 诱导的 PD-L1 表达上调，说明 STAT3 激活在 MS275 上调 PD-L1 的过程中发挥了关键作用。

综合上述研究结果，MS275 虽然在体外实验中对结直肠癌细胞具有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用，但在体内却因抑制肿瘤免疫微环境、上调 PD-L1 表达等原因，导致其单药治疗结直肠癌的效果受限。然而，研究人员发现 MS275 与抗 PD-1 免疫疗法联合使用，能够有效克服这些问题，增强抗肿瘤效果。这一发现为低 PD-L1 表达的肿瘤提供了一种潜在的治疗策略，有望成为结直肠癌治疗的新方向。不过，目前 MS275 调节肿瘤免疫微环境以及与抗 PD-1 联合治疗的具体机制尚未完全明确，仍需进一步深入研究，为未来的临床应用提供更坚实的理论基础。<【MS275 联合抗 PD-1 免疫疗法：结直肠癌治疗新希望】【为探究增强 MS275 抗结直肠癌（CRC）效果的方法，研究发现其与抗 PD-1 抗体联用可增效，或成新疗法。】【结直肠癌 | 组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）|MS275 | 程序性死亡配体 1（PD-L1）| 免疫疗法 | 肿瘤免疫微环境 | STAT3 信号通路 | 细胞增殖 | 细胞凋亡 | 动物模型】【国内】【在癌症治疗领域，结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）是个 “狠角色”。它不仅是全球第三大常见癌症，还是癌症相关死亡的 “第三大杀手”。随着生活方式的改变和人口老龄化加剧，结直肠癌的发病率逐年攀升，给全球的医疗健康体系带来了沉重的负担。目前，结直肠癌的治疗方法包括手术、化疗、放疗和靶向治疗等，但对于晚期患者，这些传统治疗手段的效果往往不尽如人意，患者的生存率和生活质量亟待提高。

在寻找更有效的治疗方案过程中，组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histone Deacetylase Inhibitors，HDACi）成为了研究的焦点之一。HDACi 能够通过调节组蛋白的乙酰化状态，影响基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长、诱导细胞凋亡。MS275（Entinostat）作为一种 I 类 HDACi，选择性地靶向 HDAC1、HDAC2 和 HDAC3，在体外实验中对多种实体瘤展现出了一定的抗肿瘤活性，尤其是在结直肠癌和乳腺癌方面，显示出了潜在的治疗价值。然而，令人遗憾的是，MS275 在临床试验中的表现却差强人意，单药治疗的效果有限，这背后的原因一直困扰着科研人员。

为了揭开这一谜团，探寻增强 MS275 抗结直肠癌效果的方法，四川大学华西基础医学与法医学院以及华西医院的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Cancer Immunology, Immunotherapy》杂志上，为结直肠癌的治疗带来了新的希望。

在本次研究中，研究人员采用了多种技术方法。细胞实验方面，运用 MTS 实验检测细胞活力、BrdU 染色评估细胞增殖、Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒分析细胞凋亡，从多个角度探究 MS275 对结直肠癌细胞的作用。在动物实验中，构建了 AOM-DSS 结直肠癌小鼠模型和原位结直肠癌模型，以观察 MS275 在体内的抗肿瘤效果；同时，通过免疫组化（IHC）染色分析肿瘤浸润免疫细胞，ELISA 测定细胞因子浓度，流式细胞术检测细胞表面标志物，深入研究 MS275 对肿瘤免疫微环境的影响。此外，还利用 RNA 提取、RT-qPCR 和 Western blotting 技术检测相关基因和蛋白的表达水平，进一步探究 MS275 作用的分子机制。

研究结果显示：

• MS275 抑制结直肠癌细胞增殖并诱导凋亡：MS275 处理结直肠癌细胞 48 小时后，蛋白的泛乙酰化水平显著增加，且呈剂量依赖性地降低细胞内 HDAC3 蛋白表达水平。对不同 KRAS 突变状态的细胞系研究发现，MS275 抑制细胞增殖的作用与 KRAS 基因突变状态无关，同时，它还能诱导细胞凋亡，且凋亡诱导作用呈剂量依赖性，在多种结直肠癌细胞系中均得到验证。
• MS275 在体内具有一定抗肿瘤活性，但效果不如体外：在 AOM-DSS 结直肠癌小鼠模型中，MS275 治疗后结肠肿瘤数量有所减少，但肿瘤总体大小无明显变化；在原位结直肠癌模型中，MS275 治疗显著抑制了肿瘤生长，且在免疫缺陷小鼠中的抑制效果比免疫健全小鼠更明显，表明 MS275 在体内的抗肿瘤效果受到免疫系统的影响。
• MS275 治疗抑制肿瘤免疫微环境：通过对 AOM-DSS 结直肠癌肿瘤模型的研究发现，MS275 处理后，肿瘤浸润的 CD3⁺T 细胞、CD8⁺T 细胞数量减少，F4/80 阳性细胞增多；同时，肠系膜淋巴结（MLNs）中促炎细胞因子 TNF-α 和 IFN-γ 上调，CD3⁺CD4⁺T 细胞比例增加，CD3⁺CD8⁺T 细胞比例下降，这些变化共同营造了一个免疫抑制的肿瘤微环境。
• MS275 上调结直肠癌中 PD-L1 的表达：无论是在体外培养的结直肠癌细胞，还是在 AOM-DSS 结直肠癌模型的肿瘤组织中，MS275 处理后均能显著上调 PD-L1 在 mRNA 和蛋白水平的表达。进一步研究发现，这种上调作用与 HDAC3 表达降低密切相关。
• MS275 与抗 PD-1 抗体联合治疗增强抗肿瘤效果：在 AOM-DSS 结直肠癌模型小鼠中，MS275 与抗 PD-1 单克隆抗体联合治疗 3 周后，与单独使用 MS275 或抗 PD-1 单克隆抗体相比，联合治疗显著抑制了肿瘤生长，减少了肿瘤数量和体积，同时促进了肿瘤细胞凋亡，抑制了细胞增殖，增加了肿瘤浸润的 CD3⁺T 细胞和 CD8⁺T 细胞数量，改变了肠系膜淋巴结中 CD4⁺T 细胞和 CD8⁺T 细胞的比例，增强了抗肿瘤免疫反应。
• STAT3 激活是 MS275 上调结直肠癌细胞中 PD-L1 的关键：研究表明，MS275 可显著上调结直肠癌细胞系和结直肠癌小鼠模型中磷酸化 STAT3 蛋白的表达水平，且 PD-L1 表达随 STAT3 磷酸化水平的变化而变化。使用 STAT3 抑制剂 Stattic 处理后，可抑制 MS275 诱导的 PD-L1 表达上调，说明 STAT3 激活在 MS275 上调 PD-L1 的过程中发挥了关键作用。

综合上述研究结果，MS275 虽然在体外实验中对结直肠癌细胞具有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用，但在体内却因抑制肿瘤免疫微环境、上调 PD-L1 表达等原因，导致其单药治疗结直肠癌的效果受限。然而，研究人员发现 MS275 与抗 PD-1 免疫疗法联合使用，能够有效克服这些问题，增强抗肿瘤效果。这一发现为低 PD-L1 表达的肿瘤提供了一种潜在的治疗策略，有望成为结直肠癌治疗的新方向。不过，目前 MS275 调节肿瘤免疫微环境以及与抗 PD-1 联合治疗的具体机制尚未完全明确，仍需进一步深入研究，为未来的临床应用提供更坚实的理论基础。