CRISPR/Cas9 技术下电穿孔与原核注射(PNI)在小鼠基因编辑中的效率比较

【字体: 时间:2025年03月18日 来源:Journal of Genetics 1.4

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  研究人员对比电穿孔和原核注射(PNI)用于小鼠基因编辑的效率,发现 PNI 敲入突变效率高,但电穿孔适用于简单敲除。

  随着 CRISPR/Cas9 基因组编辑技术的到来,模式生物的基因工程变得更快、更高效。各种 CRISPR 方法的应用也推动了转基因小鼠模型的发展。最初的研究利用原核注射(pronuclear injection,PNI)将 Cas9 mRNA 和 sgRNAs 注入受精卵阶段的胚胎,以产生基因敲除和敲入突变。不过,CRISPR 编辑的技术种类和试剂不断增加,为该领域的研究人员提供了多种基因工程选择。然而,关于通过不同方法将 Cas9 和 sgRNA / 单链 DNA 寡核苷酸(ssDNA oligos)导入胚胎时基因编辑效果的对比研究并不多。在此,研究人员旨在比较两种不同的方法:电穿孔和原核注射(PNI)。近期,电穿孔技术在小鼠模型研究中得到广泛应用,它能将 Cas9/sgRNA 核糖核蛋白复合物导入受精卵阶段的胚胎。研究人员利用该技术,通过插入缺失(indel)或敲入突变靶向失活小鼠酪氨酸酶基因,培育出了白化毛色的 C57BL/6J 小鼠。同时,研究人员还用相同的试剂采用原核注射(PNI)方案,比较这两种技术在产生插入缺失(indel)和敲入突变方面的效率。虽然原核注射(PNI)在敲入突变方面效率显著更高,但它需要专门的设备设置,以及胚胎显微操作和显微注射方面的高级培训。因此,对于通过插入缺失(indel)突变产生简单的基因敲除,电穿孔技术可以派上用场。

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