颈静脉注射伊文思蓝评估小鼠脑出血后血脑屏障（BBB）的新突破

《Translational Stroke Research》：Jugular Vein Evans Blue Injection for Blood–Brain Barrier Assessment Following Hemorrhagic Stroke in a Mouse Model

为解决伊文思蓝（EB）注射方式影响小鼠血脑屏障（BBB）评估准确性的问题，研究人员开展了颈静脉注射 EB 评估小鼠脑出血（ICH）模型 BBB 完整性的研究。结果显示该方法精确可靠，尾静脉注射成功时也可行，有助于脑血管疾病研究。

　　血脑屏障（BBB）是一种具有选择性通透功能的膜结构，在保护大脑免受有害物质侵害方面发挥着关键作用。其功能的破坏与多种中枢神经系统（CNS）疾病相关，包括出血性中风。伊文思蓝（EB）染料作为一种蛋白质结合示踪剂，常被用于评估血脑屏障（BBB）的通透性。然而，在 C57/6 小鼠实验中，注射方法会显著影响实验结果的准确性和可重复性。在本研究中，科研人员评估了在小鼠脑出血（ICH）模型中，通过颈静脉注射伊文思蓝（EB）染料来评估血脑屏障（BBB）完整性的有效性。

在脑出血（ICH）后的第 1 天，研究人员使用 Longa 和改良 Garcia 量表（GS）评估小鼠的神经功能缺损情况，以确保实验基线的一致性。随后，将小鼠麻醉，分别通过颈静脉或尾静脉注射 2% 的伊文思蓝（EB）溶液。只有尾静脉注射成功的小鼠才被纳入尾静脉注射组，而颈静脉注射方法在相应组别的所有动物中均成功应用。经过处理血浆和脑匀浆后，利用分光光度法对血浆和脑组织中的伊文思蓝（EB）浓度进行定量分析。在进行心脏灌注和组织匀浆处理后，通过测量脑组织中的伊文思蓝（EB）含量来评估血脑屏障（BBB）的通透性。在建模 24 小时后，使用 Longa 评分评估小鼠的神经功能，Longa 评分大于 1 则表明建模成功。

实验结果显示，假手术组小鼠未观察到明显的神经功能缺损，而脑出血（ICH）组的所有动物均表现出显著的神经功能缺损（P_?^{!--?0.0001）。各实验组之间的神经功能缺损情况没有明显差异（P_?>?0.05）。假手术组和脑出血（ICH）组小鼠的血浆伊文思蓝（EB）浓度均随时间下降（P_?!--?0.0001），尾静脉注射组在 30 分钟至 2 小时之间血浆伊文思蓝（EB）浓度无明显变化（P_?>?0.05），但在 24 小时时显著下降（P_?!--?0.0001）。在 30 分钟和 2 小时时，假手术组和脑出血（ICH）组颈静脉注射的血浆伊文思蓝（EB）浓度没有明显差异（P_?>?0.05），不过在 24 小时时，假手术组的血浆伊文思蓝（EB）浓度显著高于脑出血（ICH）组（P_?!--?0.05）。在 30 分钟、2 小时和 24 小时时，脑出血（ICH）颈静脉注射组和脑出血（ICH）尾静脉注射组的脑组织伊文思蓝（EB）含量没有明显差异（P_?>?0.05），但脑出血（ICH）颈静脉注射组的脑组织伊文思蓝（EB）含量高于假手术组（P_?!--?0.05）。在 2 小时和 24 小时时，脑出血（ICH）尾静脉注射组和假手术组的脑组织伊文思蓝（EB）含量没有明显差异，不过尾静脉注射组的伊文思蓝（EB）分布更为分散。此外，在 2 小时后，脑出血侧脑组织的伊文思蓝（EB）含量显著高于非脑出血侧（P_?!--?0.05），但在 24 小时时这种差异消失。}

综上所述，颈静脉注射伊文思蓝（EB）染料为评估小鼠脑出血（ICH）模型中的血脑屏障（BBB）完整性提供了一种精确、可靠且可重复的方法。当尾静脉注射成功时，也可作为评估血脑屏障（BBB）的有效替代方法。该技术相较于其他方法具有显著优势，有助于在脑血管疾病研究中更准确地评估血脑屏障（BBB）功能。