血浆外泌体 miR-363-3p 调控 ITP 患者 Tregs 免疫抑制功能新机制

为探究原发性免疫性血小板减少症（ITP）中调节性 T 细胞（Tregs）功能降低的机制，研究发现 ITP 患者血浆外泌体通过 miR-363-3p 降低 Tregs 功能，为 ITP 治疗提供新方向。

　　原发性免疫性血小板减少症（Primary Immune Thrombocytopenia，ITP）是一种令人头疼的自身免疫性血液疾病，患者体内血小板数量大幅减少，就像身体里的 “止血小卫士” 不够用了，皮肤和黏膜容易出血，严重时甚至会出现颅内出血，给患者带来极大痛苦。不仅如此，伴随的高血压、血栓、骨质疏松等并发症，也让患者家庭和社会的经济负担加重。虽然目前有静脉注射免疫球蛋白（IVIg）、皮质类固醇，以及一些如血小板生成素受体激动剂等新型疗法，但由于 ITP 的发病机制尚未完全明确，治疗手段仍十分有限。在 ITP 的发病过程中，调节性 T 细胞（Regulatory T cells，Tregs）起着关键作用，它就像是免疫系统的 “调节阀门”，原本具有免疫抑制功能，能维持免疫平衡。可在 ITP 患者体内，Tregs 数量减少、功能受损，导致免疫失衡，血小板遭到自身免疫系统的错误攻击。而 T-box 转录因子 21（TBX21）?Tregs 更是其中重要的一环，它能抑制 Th1 细胞过度活跃，防止免疫反应失控，但在 ITP 患者中其功能也出现异常。此外，血浆外泌体在 ITP 中也有一定作用，不过它对 Tregs 的调节机制却还是个未解之谜。

为了揭开这些谜团，温州医科大学等机构的研究人员开展了深入研究。他们的研究成果发表在《Inflammation》杂志上，为 ITP 的治疗带来了新的希望。

在这项研究中，研究人员运用了多种关键技术方法。他们收集了 15 例 ITP 患者和 15 例健康对照者的样本（样本来自苏州 100 医院），采用单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）分析外周血 Tregs，探究其基因表达特征；利用染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）研究相关基因的调控关系；通过流式细胞术分析和分选 Tregs，检测其表面和细胞内分子表达；运用外泌体分离和分析技术，获取并鉴定血浆外泌体；还进行了转染实验和实时荧光定量 PCR，研究基因表达调控机制 。

下面来看看具体的研究结果：

• ITP 患者血浆外泌体削弱 Tregs 抑制功能：研究人员收集并鉴定了血浆样本中的外泌体，发现 ITP 患者外周血中 Tregs 的比例明显低于健康人。进一步实验表明，与健康个体的 Tregs 相比，ITP 患者的 Tregs 在与 ITP 患者血浆外泌体（pExo）共培养时，抑制常规 CD4?T 细胞增殖的能力显著下降，且对 Th1（CD4?IFN-γ?）细胞亚群的抑制能力也明显减弱，而对 Th2 和 Th17 细胞的抑制作用无明显变化。
• ITP 患者血浆外泌体影响 Tregs 中 TBX21 表达：研究发现，ITP 患者血浆外泌体可抑制 Tregs 中 TBX21 的表达。单细胞 RNA 测序数据显示，C14 Treg 亚群中 TBX21 表达较高，而 TBX21?调控子活性在 C13 亚群中较高。通过对 Treg 亚群的基因调控网络分析，还发现 ARID3A（AT-rich interaction domain 3A）和 SPI1（Spi-1 proto-oncogene）与 TBX21 存在调控关系。
• C13 向 C14 分化过程中相关调控子变化：利用 Monocle 伪时间分析，研究人员发现 C13 和 C14 处于 Treg 分化的早期阶段，C13 可分化为 C14。在这个过程中，ARID3A?和 SPI1?调控子的转录水平逐渐增加，且相关基因的表达也发生变化，这表明这些调控子可能在 C13 向 C14 的分化过程中发挥重要作用。
• miR-363-3p 对 Tregs 功能的影响：研究人员发现，ITP 患者血浆外泌体中 miR-363-3p 水平升高，且与血小板计数呈负相关。miR-363-3p 可靶向结合 ARID3A 的 3’非翻译区（UTR），导致 ARID3A 表达下降，进而使 SPI1 和 TBX21 表达减少，最终削弱 Tregs 对 Th1 细胞的免疫抑制功能。通过转染实验和添加 miR-363-3p 抑制剂的实验，进一步验证了这一调控机制。

综合研究结果和讨论部分来看，这项研究意义重大。它首次揭示了 ITP 患者血浆外泌体通过 miR-363-3p/ARID3A/SPI1/TBX21 轴降低 Tregs 功能的新机制，发现了 Tregs 中具有高 TBX21?调控子活性的亚群，以及其在 ARID3A?和 SPI1?调控子影响下的分化关系。这不仅加深了人们对 ITP 发病机制的理解，更为开发针对 ITP 的新型治疗策略提供了潜在的分子靶点和理论依据。不过，该研究也存在一定局限性，如体外实验无法完全模拟体内复杂的免疫环境，ARID3A/SPI1/TBX21 通路在 ITP 中的具体作用机制还需进一步研究。但总体而言，这项研究为 ITP 的治疗开辟了新的方向，有望在未来为 ITP 患者带来更有效的治疗方法。