JAK2V617F金纳米颗粒调控核酸感应通路：费城染色体阴性骨髓增殖性肿瘤潜在新疗法

为探究 JAK2V617F环境下核酸感应通路作用，研究人员用 ON-GNPs 处理细胞，发现其可调节相关通路，为 Ph-MPNs 治疗提供新方向。

　　在医学研究的广阔领域中，血液疾病一直是科研人员重点攻克的难题。费城染色体阴性骨髓增殖性肿瘤（Philadelphia chromosome-negative myeloproliferative neoplasms，Ph-MPNs）就是这样一种令人棘手的疾病，它属于克隆性造血干细胞紊乱病症，特点是骨髓细胞过度生成，对细胞因子信号反应缺失，还伴随着基因组不稳定以及细胞质中核酸积累。

正常情况下，人体的免疫系统如同精密的防御堡垒，其中 Toll 样受体（Toll-like receptors，TLRs）家族，尤其是 TLR9，能识别病原体和内源性核酸，在先天免疫和适应性免疫中发挥关键作用。还有受体晚期糖基化终产物（receptor for advanced glycation end products，RAGE），它能帮助核酸进入细胞，激活免疫反应。另外，环鸟苷酸 - 腺苷酸合成酶（cyclic GMP-AMP synthase，cGAS）- 干扰素基因刺激蛋白（stimulator of interferon genes，STING）通路，也在检测细胞质 DNA、启动免疫反应中至关重要。然而，在 Ph-MPNs 患者体内，这些正常的免疫机制被打乱了。JAK2^V617F突变让 JAK2 蛋白持续激活，不仅影响造血功能，还干扰免疫细胞功能和细胞因子生成，引发慢性炎症，推动疾病进展。

为了深入了解这些复杂的机制，找到治疗 Ph-MPNs 的新方法，来自伊斯坦布尔大学（Istanbul University）的研究人员展开了一项极具意义的研究。他们把目光聚焦在寡核苷酸 - 金纳米颗粒结合物（oligonucleotide-gold nanoparticle conjugates，ON-GNPs）上，这种结合物稳定性好、能高效进入细胞，或许可以调节核酸感应通路，成为治疗 Ph-MPNs 的新希望。相关研究成果发表在《Immunogenetics》杂志上。

研究人员开展这项研究运用了多种关键技术方法。细胞培养技术方面，使用了携带不同 JAK2^V617F等位基因的人红白血病细胞系（HEL）、人巨核细胞白血病细胞系（SET-2）和人慢性髓性白血病细胞系（K562），并在特定培养基中培养。mRNA 提取和实时定量逆转录聚合酶链反应（real-time quantitative RT-PCR）技术，用于分析关键基因的表达水平。还有流式细胞术，能够检测细胞表面和细胞质中 RAGE 和 TLR9 的表达。另外，通过 LEGENDplex? Human Inflammation Panel-1 检测细胞培养上清液中细胞因子的浓度。

研究结果主要从以下几个方面展开：

1. 炎症相关基因的延迟激活：研究人员用靶向野生型 JAK2、JAK2^V617F的 ON-GNPs 和对照序列处理细胞后发现，在处理后的前 24 小时，TLR9 的表达相对稳定，但在 24 - 48 小时显著增加，72 小时又回到基线水平，其中 SET2 细胞的变化最为明显。IRF7 的表达在早期变化不大，24 - 48 小时显著增加，72 小时恢复正常，JAK2^V617F - GNPs 能让 HEL 和 SET2 细胞中的 IRF7 表达大幅提高。NFKB1 的表达在短时间处理时没变化，24 小时显著增加，72 小时又下降，不同细胞系对其表达的变化存在差异。
2. cGAS-STING 通路的延迟激活：延长 ON-GNPs 处理时间至 72 小时，所有细胞系的 cGAS 表达都显著增加，但不同细胞系对不同处理的反应不同。STING 的表达大多不受影响，只在部分细胞系和特定处理条件下有变化。TBK1 表达总体稳定，IRF3 表达在不同细胞系和处理时间下呈现出不同的变化趋势。JAK2 的表达在处理后先被抑制，然后在部分细胞系中出现上调。
3. 对 TLR9 和 RAGE 受体的影响：通过流式细胞术分析发现，用 JAK2 和 JAK2^V617F - GNPs 处理 HEL 细胞后，细胞质中 TLR9 的表达以及细胞表面和细胞质中 RAGE 的蛋白水平在短期（2 小时）和长期（24 小时）刺激下都没有明显变化，这表明 TLR9 的调节机制可能不依赖 RAGE 介导的途径。
4. 对炎症细胞因子的影响：研究人员检测了 HEL 和 SET2 细胞培养上清液中多种细胞因子的浓度，发现 ON-GNPs 处理后，HEL 细胞培养上清液中的 IL-8 水平显著升高，在 48 小时达到峰值，SET2 细胞的细胞因子谱也呈现出相应变化。

研究结论和讨论部分指出，这项研究揭示了 ON-GNPs 可以调节核酸感应通路，在短期抑制炎症信号，长期则诱导 TLR9 和 IRF7 激活。IRF7 在 JAK2^V617F阳性的 HEL 和 SET2 细胞中显著上调，与 IL-8 分泌增加相关，反映了不同类型 Ph-MPNs 的炎症差异。cGAS/STING 通路在不同细胞系中的调节机制复杂，ON-GNPs 对其有间接调节作用。此外，ON-GNPs 调节 IL-8 等细胞因子的能力，显示出其在治疗 Ph-MPNs 炎症和增殖方面的潜力。

总的来说，该研究首次建立了 IRF7 与 MPNs 病理生理之间的联系，证明了 ON-GNPs 调节关键炎症通路的潜力，为基于 ON-GNPs 的疗法奠定了基础，有望为 Ph-MPNs 患者带来新的治疗方案，开启精准治疗的新篇章。