新型 MBT LipidART 模块检测大肠杆菌和肺炎克雷伯菌对粘菌素耐药性的性能评估

研究人员评估 MBT LipidART 模块检测大肠杆菌和肺炎克雷伯菌粘菌素耐药性，其对大肠杆菌检测效果更好。

　　在当今医疗领域，细菌耐药性问题愈发严峻，尤其是碳青霉烯耐药（CR）的革兰氏阴性杆菌（GNB）感染，治疗起来困难重重。这类细菌中，产碳青霉烯酶（CP）的 GNB，特别是携带金属 -β- 内酰胺酶（MBL）的菌株，更是让人头疼。在斯洛文尼亚，产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌（CPE）的流行率不断攀升，其中产 MBL 的菌株占比很高，在 2022 年新检测出的 CPE 患者中，携带 MBL 和 OXA - 48 的菌株占比达到了 51%。

面对这一困境，粘菌素成为治疗 CPE 感染的最后一道防线之一。然而，传统的参考肉汤微量稀释（BMD）法检测粘菌素耐药性需要耗费一天时间才能出结果，这对于急需精准治疗方案的患者来说，时间太过漫长。为了更快地检测出粘菌素耐药性，研究人员一直在努力探索新的方法。

在此背景下，来自卢布尔雅那大学医学院微生物学和免疫学研究所的 Julija Germ 和 Mateja Pirs 开展了一项研究，旨在评估基于 MALDI Biotyper? Sirius 系统的 MBT LipidART 模块，通过分析脂质 A 谱在负离子模式下快速检测大肠杆菌（EC）和肺炎克雷伯菌（KPN）对粘菌素耐药性的性能。该研究成果发表在《European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases》杂志上。

研究人员在开展研究时，用到了几个主要关键的技术方法。首先，他们使用 MALDI TOF MS（Microflext LT，Bruker Daltonics，德国）对收集的菌株进行鉴定。然后，采用 Sensititre? FRCOL BMD 平板（Thermo Scientific，美国），按照 EUCAST 标准，对粘菌素敏感性进行重复测试。对于 MBT LipidART 模块检测，研究人员根据制造商的说明，使用 MBT Lipid Xtract^TM试剂盒从过夜培养的细菌中提取脂质 A，再用 DHB 基质将提取的沉淀重复点样到一次性 MBT Biotarget 96 孔板上，手动校准后在负离子模式下获取质谱图，并用 FlexAnalysis v.3.4 软件进行处理分析。

研究结果如下：

• 实验菌株情况：研究共纳入了 98 株菌株，其中包括 58 株大肠杆菌（32 株对粘菌素耐药，26 株敏感，14 株为超广谱 β - 内酰胺酶（ESBL）产生菌，无 CR/CPE 菌株）和 40 株肺炎克雷伯菌（16 株对粘菌素耐药，24 株敏感，17 株为 ESBL 产生菌，8 株为 CR 菌株，其中 6 株为 CPE）。
• MBT LipidART 模块对大肠杆菌的检测结果：对于大肠杆菌，MBT LipidART 模块的分类一致性（CA）达到了 98.3%。26 株敏感菌株全部被正确识别为 ColS - N；32 株耐药菌株中，31 株被成功检测出来，仅有 1 株因结果不一致需要重新检测。在 31 株确认的耐药菌株中，16 株染色体编码的耐药菌株在区分质粒和染色体耐药方面表现不佳；14 株 mcr - 1 介导的耐药菌株被准确鉴定为 ColR - P，而唯一的 1 株 mcr - 2 分离株虽被识别为耐药，但在耐药机制分类上存在偏差。
• MBT LipidART 模块对肺炎克雷伯菌的检测结果：肺炎克雷伯菌的检测结果则更具挑战性。40 株菌株中有 12 株需要重新检测，原因包括结果无效（7 株）、不一致（2 株）或结果不符（3 株）。重新检测后，仍有 5 株菌株无法获得有效结果。最终，CA 为 85.0%，部分菌株因粘液样和贴壁特性影响了样本制备，导致检测困难。

研究结论和讨论部分指出，MBT LipidART 模块在快速检测粘菌素耐药性方面具有一定潜力，操作时间仅需 30 分钟，大大提高了工作效率。然而，该检测方法目前仅用于研究用途（RUO），尚未适用于临床应用。一方面，手动校准在技术上要求较高；另一方面，肺炎克雷伯菌样本制备问题以及可能存在的其他耐药机制，影响了其检测性能。不过，对于大肠杆菌的检测性能表现优异。未来，进一步开发 LipidART 软件和优化样本制备方案，有望提高其可靠性，使其在临床应用中发挥更大作用。这项研究为后续更深入地探索粘菌素耐药性检测方法，以及优化抗菌治疗策略，提供了重要的参考依据。