整合绿色分析化学与分析质量设计：恩西芬特林（Ensifentrine）含量测定新方法的创新突破

研究人员为测定恩西芬特林（EFT），整合 AQbD 和 GAC 开发 RP-UPLC 法，该法经验证且具环境可持续性。

　　### 研究背景：呼吸疾病治疗的新挑战与机遇
慢性阻塞性肺疾病（COPD）就像一个隐藏在全球健康领域的 “大反派”，随着污染的加剧和现代化进程的推进，它对人类健康的威胁愈发严重。这种疾病以慢性呼吸道炎症、气道重塑、急性加重和过多黏液分泌为特征，最终导致不可逆的气流阻塞。尽管目前有一些治疗手段，但很多患者在接受现有治疗后，仍然被症状所困扰。

在寻找新疗法的道路上，科学家们把目光投向了磷酸二酯酶（PDE）3 和 PDE4 抑制剂。PDE3 在气道平滑肌中调节环磷腺苷（cAMP）和环磷鸟苷（cGMP），影响支气管的紧张度；PDE4 则在炎症细胞中调节 cAMP 。对 PDE3 和 PDE4 的双重抑制，可能会带来额外的支气管扩张和抗炎效果。恩西芬特林（Ensifentrine，EFT）作为一种新型的 PDE3 和 PDE4 双重抑制剂，专为吸入治疗设计，它瞄准了气道炎症和纤毛功能，在 COPD 治疗中展现出了巨大的潜力。

然而，在 EFT 的研究和应用过程中，一个关键问题出现了：由于缺乏稳定性研究报告、分析方法验证以及利用超高效液相色谱（UPLC）结合分析质量设计（AQbD）和绿色分析化学（GAC）的方法开发，无法准确测定 EFT 的含量。这就好比在黑暗中摸索，没有精准的地图，难以确定方向。为了解决这个问题，来自多个研究机构的研究人员展开了深入研究，他们的成果发表在了《BMC Chemistry》杂志上。

研究方法：多技术融合的创新探索

研究人员采用了一系列先进的技术方法来攻克难题。在仪器设备方面，他们使用沃特世 Acquity UPLC 系统搭配光电二极管阵列（PDA）检测器，对 EFT 进行分析。利用 Design-Expert? 软件和中心复合设计，构建 AQbD 框架，以此优化 RP-UPLC 方法。

为了制备样本和标准溶液，研究人员也做了精心准备。选择 50:50 的乙腈 - 水混合物作为稀释剂，以确保药物的溶解性。通过精确称量和一系列操作，制备了标准储备溶液、标准工作溶液、样本储备溶液和样本工作溶液。

在研究过程中，应力降解研究也至关重要。研究人员按照国际人用药品注册技术协调会（ICH）的 Q1A（R2）和 Q1B 指南，对 EFT 在热、氧化（过氧化物）、水解（碱性和酸性）、中性（稀释剂）和光解等各种应力条件下进行评估。此外，还依据 ICH 指南 Q2（R1）对最终确定的分析方法进行全面验证，包括特异性、系统适用性、准确性、稳健性、精密度、溶液稳定性、检测限（LOD）、定量限（LOQ）和线性等方面的评估。

研究结果：新方法的卓越表现

1. 方法优化成果：经过一系列优化，研究人员确定了 RP-UPLC 的最佳分析条件。在环境温度下，使用 ACQUITY UPLC HSS C₁₈ SB 柱进行等度分离，流动相为 0.01 N KH₂PO₄（pH 5.4）和乙腈（66.4:33.6 v/v），流速为 0.27 mL/min，检测波长为 272.0 nm。通过实验设计，研究人员考察了流速、流动相中有机相百分比和温度等因素对保留时间、理论塔板数和拖尾因子的影响，最终得到了最佳的色谱条件。
2. 方法验证结果：系统适用性方面，各项参数均符合 ICH 指南，拖尾因子小于 2，分辨率大于 2，理论塔板数超过 2000。特异性良好，在 EFT 的保留时间（1.207 min）处，空白和安慰剂溶液均无干扰。线性范围为 3.75 - 22.5 μg/mL，相关系数达到 0.9997，表明该方法在这个浓度范围内具有高度的线性响应。精密度方面，日内重复性的相对标准偏差（% RSD）为 0.40%，日间精密度的 % RSD 为 0.50%，显示出该方法的高可靠性。准确性评估中，采用标准加入法，平均回收率为 100.17%，% RSD 小于 2.0，说明该方法准确性令人满意。LOD 为 3.3 μg/mL，LOQ 为 10 μg/mL。在稳健性研究中，即使改变流速（0.1 - 0.3 mL/min）、柱温（24 - 35 °C）和流动相组成（62B:38A 至 69B:34A），该方法仍不受影响，系统适用性参数基本不变，% RSD 保持在可接受范围内。溶液稳定性研究发现，样品和标准溶液在 50:50（v/v）乙腈：水的稀释剂中，于 5 °C 下可稳定保存 48 h。
3. 含量测定与降解研究：对标记为含 100 mg EFT 的吸入产品 Ohtuvayre 进行含量测定，平均含量结果为 99.93%。在强制降解研究中，EFT 在光解和中性条件下降解极少（小于 2%）；酸水解时降解 5.15%，降解峰出现在 0.747 min；碱水解时降解 4.38%，降解峰在 0.790 min；氧化和热降解分别为 4.81% 和 3.23%，且降解峰均无干扰。
4. 绿色分析评估：研究人员使用 ComplexMoGAPI、ChlorTox Scale、AGREE、Analytical Eco-scale 和 BAGI 等工具对方法的绿色性进行评估。ComplexMoGAPI 计算得分 71，表明该方法在环境可持续性方面有提升空间；ChlorTox Scale 使用 WHN 模型和 CHEMS-1 模型计算出总 ChlorTox 值分别为 1.24 g 和 1.32 g，评估了化学风险；AGREE 工具给出的总体评分为 0.55，显示该方法具有一定的环保特性；Analytical Eco-scale 的生态评分为 58，表明该方法环境友好；BAGI 评分为 70，说明该方法在实际应用中具有潜力。

研究结论与意义：为药物分析开辟新道路

这项研究成功地整合了 AQbD 和 GAC 原则，开发并验证了一种用于定量 EFT 的灵敏且稳健的 RP-UPLC 方法。该方法不仅满足了 EFT 含量测定的需求，还在环境可持续性方面表现出色，为未来药物分析方法的开发树立了新的标杆。

通过全面的方法验证，确保了该方法的可靠性和准确性，能够为 EFT 的质量控制和临床应用提供有力支持。在绿色分析评估中，多种工具的使用从不同角度展示了该方法在环保方面的优势，为其他药物分析方法的绿色化改进提供了参考。

此外，研究中采用的 AQbD 和 GAC 相结合的策略，为药物分析领域提供了一种创新的思路，有助于推动整个制药科学朝着更加可持续的方向发展。它就像一把钥匙，打开了通往高效、环保药物分析的大门，让我们在保障人类健康的道路上又迈出了坚实的一步。