靶向长链非编码 RNA INCR1 增强胶质母细胞瘤 IL12 免疫治疗效果

研究人员针对胶质母细胞瘤（GBM）的 IL12 基因治疗难题，研究沉默 INCR1 的效果，发现其可提升疗效。

　　

胶质母细胞瘤免疫治疗的困境与突破：靶向 INCR1 的新策略

在癌症治疗领域，胶质母细胞瘤（Glioblastoma，GBM）是一种极其棘手的存在。它是大脑中最常见且侵袭性最强的原发性癌症，尽管手术、化疗和放疗等治疗手段不断发展，但 GBM 患者的中位生存期仍仅约 20.9 个月。免疫疗法为攻克 GBM 带来了新希望，然而 GBM 高度免疫抑制的微环境，使其对免疫治疗产生抗性，相关临床试验成效不佳。

白细胞介素 12（Interleukin 12，IL12）作为一种强大的免疫激活细胞因子，能增强天然免疫和适应性免疫，在肿瘤免疫治疗中极具潜力。研究发现，向 GBM 患者瘤周注射可调节的 IL12 基因疗法，能增加肿瘤内的炎症浸润，提升干扰素 -γ（IFNγ）水平。但这也伴随着肿瘤程序性细胞死亡配体 1（PD-L1）和程序性细胞死亡 1（PD1）阳性细胞的增多，导致免疫逃逸。而且，IL12 基因疗法联合 PD-1 免疫检查点抑制剂并未提升疗效，这表明单一免疫检查点的抑制不足以克服 GBM 对 IL12 诱导免疫的逃避。因此，寻找调节多个免疫抑制基因表达的共同途径，成为突破 IL12 基因治疗局限的关键。

来自哈佛医学院、布莱根妇女医院等机构的研究人员开展了一项研究，旨在评估沉默具有免疫抑制作用的长链非编码 RNA（Long noncoding RNAs，lncRNAs）INCR1（Interferon-stimulated noncoding RNA 1）联合 IL12 治疗的效果。该研究成果发表在《Journal of Neuro-Oncology》上。

研究人员采用了多种关键技术方法。在样本获取上，收集了经患者同意、由丹娜 - 法伯癌症研究所伦理委员会批准的肿瘤组织样本。通过 RNAscope 原位杂交技术，分析 INCR1 和 PD-L1 在 GBM 患者肿瘤组织中的表达情况；运用定量 PCR 检测与免疫细胞共培养的 GBM 细胞中免疫抑制基因的表达；利用 RNA 测序评估 INCR1 和 PD-L1 沉默对免疫抑制基因表达的影响；借助 3D 细胞毒性试验，评估免疫细胞对 GBM 肿瘤细胞的杀伤活性。

研究结果如下：

1. INCR1 和 PD-L1 表达上调：对接受 IL12 基因治疗的 GBM 患者肿瘤组织进行 RNAscope 原位杂交，发现治疗后 INCR1 和 PD-L1 的表达均上调。这表明 IL12 基因治疗可能引发了免疫逃逸机制，与免疫治疗抗性有关。
2. IL12 诱导免疫抑制基因表达：将患者来源的 GBM 细胞与外周血单个核细胞（PBMCs）共培养，并使用 IL12 处理，结果显示 IL12 刺激后，共培养的 GBM 细胞中 INCR1 以及多个免疫抑制基因表达增加，包括免疫检查点分子、免疫抑制酶和细胞因子等。这说明反复使用 IL12 可能诱导肿瘤产生免疫抑制特性。
3. 沉默 INCR1 增强免疫细胞杀伤活性：利用稳定敲低 INCR1 的 U251 细胞系，与 PBMCs 共培养。实验表明，IL12 处理后，敲低 INCR1 的肿瘤细胞对 PBMCs 的细胞毒性更敏感。这意味着沉默 INCR1 有望提高 IL12 治疗的疗效。
4. INCR1 是更优治疗靶点：通过 RNA 测序分析 PD-L1 沉默对基因表达的影响，并与 INCR1 沉默进行比较。结果显示，沉默 INCR1 下调的免疫抑制基因数量远多于 PD-L1，且在改善 IL12 介导的 PBMC 对肿瘤细胞的细胞毒性方面，沉默 INCR1 比使用抗 PD-1/PD-L1 单克隆抗体效果更好。这表明 INCR1 是比 PD-L1 更有效的治疗靶点。
5. ASO 靶向 INCR1 的效果：设计并测试了针对 INCR1 的反义寡核苷酸（ASOs），发现 ASO#3 能有效降低 INCR1 表达，并减少多种免疫抑制分子的表达。这提示 ASOs 可能是针对 GBM 患者靶向 INCR1 的有效治疗工具。

研究结论和讨论部分指出，INCR1 在接受 IL12 基因治疗的 GBM 患者中表达上调，靶向 INCR1 比靶向 PD-L1 能减少更多免疫抑制分子，增强肿瘤细胞对 IL12 介导的免疫细胞杀伤的敏感性。而且，与免疫检查点抑制剂相比，沉默 INCR1 能更有效地增强 IL12 刺激的免疫细胞的抗肿瘤活性。因此，靶向 INCR1 为提高 GBM 中 IL12 免疫治疗的疗效提供了一种有前景的方法，甚至可能对其他肿瘤的治疗也有借鉴意义。不过，该研究也存在一定局限性，如缺乏免疫健全的小鼠模型进一步在体内验证数据。未来可通过研究人 GBM 类器官或开发人源化小鼠模型等方式进行深入探究。同时，还需开展临床前研究评估 INCR1 抑制联合 IL12 治疗的安全性。总体而言，这项研究为 GBM 的免疫治疗开辟了新方向，有望为患者带来新的希望。