人类靶向 CSPG4 的 CAR 巨噬细胞抑制黑色素瘤生长：新型免疫疗法的突破

为解决黑色素瘤治疗难题，研究人员开展 CAR 巨噬细胞研究，发现其可抑制黑色素瘤生长，意义重大。

　　在癌症治疗的广阔战场上，黑色素瘤一直是个棘手的 “敌人”。大约一半的黑色素瘤患者会出现复发，或者对当前的标准治疗方案没有反应，这让寻找新的治疗方法变得迫在眉睫。嵌合抗原受体（CAR）T 细胞疗法在血液恶性肿瘤治疗中成绩斐然，可面对实体瘤时却有些 “力不从心”。这是因为实体瘤有着复杂的生物学特性，比如肿瘤异质性使得 CAR - T 细胞难以彻底清除肿瘤细胞，容易导致治疗抵抗和肿瘤复发；肿瘤细胞外基质形成的致密物理屏障，阻碍了 T 细胞的有效浸润；还有高度免疫抑制的微环境，会让 CAR - T 细胞 “缴械投降”，失去抗肿瘤活性。

在这样的困境下，美国犹他大学医学院等机构的研究人员另辟蹊径，将目光投向了巨噬细胞。巨噬细胞在实体瘤中大量存在，作为专业的吞噬细胞，它们不仅能轻松突破肿瘤周围的屏障，还能通过抗原呈递调节其他免疫细胞，是肿瘤免疫治疗的理想选择。于是，研究人员开展了利用 CAR 巨噬细胞（CAR - Ms）治疗黑色素瘤的研究，相关成果发表在《Oncogene》上。

研究人员为开展此项研究，运用了多种关键技术方法。在细胞实验方面，进行了细胞培养，包括使用多种黑色素瘤细胞系如 A375、624 - mel、WM793 等 。通过单细胞 RNA 测序分析 CSPG4 在健康组织和黑色素瘤肿瘤中的转录水平；采用流式细胞术检测细胞表面分子表达、分析吞噬作用等。构建 3D 模型模拟肿瘤生长环境，观察 CAR - Ms 与肿瘤细胞的相互作用。在动物实验方面，建立了免疫缺陷小鼠的黑色素瘤异种移植模型，进行体内实验探究 CAR - Ms 对肿瘤生长的影响。

下面来看看具体的研究结果：

• CSPG4 靶向的 CAR - Ms 吞噬表达 CSPG4 的癌细胞：研究人员选择了在黑色素瘤中高度表达且在正常组织中低表达的硫酸软骨素蛋白聚糖 4（CSPG4）作为靶点。他们构建了携带不同单链可变片段（scFv）的 CAR - Ms，这些 CAR - Ms 能够特异性地吞噬表达 CSPG4 的黑色素瘤细胞，且吞噬作用具有特异性，只针对 CSPG4 表达的细胞。
• CSPG4 靶向的 CAR - Ms 单独作用不会降低黑色素瘤细胞的存活率：通过实验发现，虽然 CAR - M^aCSPG4对黑色素瘤细胞的吞噬作用较强，但主要是细胞蚕食（trogocytosis），整体的全细胞吞噬水平较低，不足以降低黑色素瘤细胞的存活率。
• 联合 CSPG4 靶向的 CAR - Ms 与 αCD47 抑制黑色素瘤在 3D 环境中的生长：考虑到黑色素瘤细胞表面高表达的 CD47 会发出 “别吃我” 的信号，抑制巨噬细胞的吞噬作用。研究人员在 3D 培养体系中，将 CSPG4 靶向的 CAR - Ms 与 αCD47 联合使用。结果发现，二者协同作用，显著增强了对黑色素瘤细胞的吞噬作用，导致黑色素瘤细胞死亡，有效抑制了黑色素瘤球体的生长。而且，降低 αCD47 的浓度仍能增强 CSPG4 - CAR - M 介导的全细胞吞噬作用，并且预先与癌细胞共培养的 CAR - Ms（“primed”）表现出更高的吞噬能力。
• CSPG4 靶向的 CAR - Ms 抑制黑色素瘤在体内的生长：研究人员在免疫缺陷小鼠模型中进行实验，发现 CSPG4 靶向的 CAR - Ms 能够抑制黑色素瘤的生长。并且，即使在 CAR - Ms 不再存在于肿瘤中后，肿瘤生长抑制作用仍然持续，这表明先天免疫系统足以介导这种抑制作用，可能是通过重新编程肿瘤相关巨噬细胞，增强了对黑色素瘤细胞的吞噬作用。

研究结论和讨论部分表明，这项研究揭示了 CAR - Ms 治疗黑色素瘤的潜力。将 CSPG4 作为靶点，CAR - Ms 能够有效吞噬转移性黑色素瘤细胞，联合 αCD47 抗体可显著抑制黑色素瘤的生长。虽然 CAR - Ms 在肿瘤中的持续时间较短，但仍能实现对肿瘤生长的长期控制，这为黑色素瘤的治疗提供了新的策略和方向。然而，研究也提出了一些有待进一步探索的问题，比如 CAR - Ms 在肿瘤中持续存在的时间对肿瘤控制的影响、CAR - Ms 介导的免疫重编程机制，以及如何优化治疗方案以提高疗效和安全性等。这些问题的深入研究将有助于推动 CAR - Ms 技术在黑色素瘤治疗中的临床应用，为更多患者带来希望。