NMDA 受体拮抗剂 MK-801 对大鼠盐摄入及味觉反应的影响研究

来自巴西的研究人员探究 MK-801 对大鼠口内盐味觉反应的影响，发现其抑制盐摄入但不改变盐适口性。

　　摘要：腹腔注射 N - 甲基 - D - 天冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂地卓西平（MK-801）会阻断大鼠的钠食欲敏化。因此，NMDA 受体对于应对间歇性或慢性脱水及盐缺乏时的摄食行为适应似乎很重要。在盐味觉反应测试中，对口腔内输注盐的口面部躯体运动反应可作为盐适口性的指标。本研究旨在探究腹腔注射 MK-801（0.15 毫克 / 千克）是否会改变对口腔内输注盐（0.3M NaCl）的口面部反应。在实验 1 中，在皮下注射利钠 / 利尿药呋塞米并去除环境中的钠 24 小时后进行测试。与对照组相比，MK-801 平均抑制了 60% 的盐摄入量，但未改变盐的适口性。在实验 2 中，MK-801 与快速发作（1 小时潜伏期）的钠食欲发作期配对，即对呋塞米与低剂量卡托普利（Furo/Cap）的组合做出反应。每隔三天将 MK-801 或其对照剂与 Furo/Cap 配对一次，共进行三次。在最后一次配对三天后进行的配对后试验中，虽然 MK-801 如预期一样阻断了盐摄入敏化，但它对 Furo/Cap 引起的盐适口性没有影响。在实验 3 中，MK-801 抑制了禁食 24 小时动物的食物摄入量，以及相应的与进食相关的水摄入量，平均抑制率为 60%。结果表明，MK-801 对盐摄入敏化的抑制作用并非依赖于增加的盐厌恶，但不能排除一般行为抑制在这种作用中的参与。

引言：钠摄入敏化是与人类健康相关的行为模型。在大鼠中，敏化的标准基于在钠缺乏导致的细胞外脱水情况下钠摄入量的增加。这种对水盐平衡挑战做出的行为强度增加是由过去实验诱导的间歇性钠缺乏引起的。城市环境中的人类饮食习惯导致个人钠摄入量较高，当与慢性脱水和压力相关联时，会影响情绪和心血管功能。

NMDA 受体拮抗剂 MK-801 一直是临床前模型中研究行为敏化和谷氨酸依赖性神经可塑性的常用药物，这些模型涉及认知、运动、疼痛和精神分裂症等方面。NMDA 受体还介导大鼠钠食欲的敏化。除了产生钠食欲外，血管紧张素 II 本身通过使大脑为未来钠摄入量的增加做准备，来决定这种食欲的敏化。血管紧张素 II 对于增加盐味的适口性也很重要。被 MK-801 破坏的钠摄入敏化机制涉及肾素 - 血管紧张素系统的局部成分，包括血管紧张素 II AT₁受体，这些受体存在于终板，即血管紧张素 II 促钠摄入作用的大脑靶点。

然而，我们不知道 NMDA 受体在钠食欲敏化（通过增加钠摄入量来确定）中的作用是否与盐味适口性的变化有关。腹腔注射 MK-801 与快速发作的钠食欲产生配对时，会阻止血管紧张素 II 依赖性的钠摄入敏化。它也可能产生条件性味觉厌恶，而钠食欲敏化可能与盐味的显著性增加有关。因此，我们可能预测 MK-801 会降低盐味的适口性。

我们可以通过视频记录对激活已知味觉的少量口腔内输注溶液的口面部躯体运动反应，来评估像盐味这样的味觉的适口性，而不涉及摄食后的影响。例如，在味觉反应测试中，适口性增加对应于享乐性口面部反应增加、厌恶性口面部反应减少或两者兼有。适口性降低则对应于每种反应数量的相反模式。我们实验室的结果表明，血管紧张素 II 通过增加 0.3M NaCl 的适口性来控制对口内盐的口面部反应。

本研究的目的是在有钠缺乏史的钠缺乏大鼠的盐味觉反应测试（“味觉测试”）中，探究腹腔注射 MK-801 是否会改变对口腔内输注 0.3M NaCl 的口面部反应。

在第一组大鼠中，一半用对照剂处理，一半用 MK-801 处理，我们在味觉测试中记录钠食欲，即对口腔内输注 0.3M NaCl 的口面部反应，以及在两瓶液体摄入测试（0.3M NaCl 和水）中记录。这两项测试在全身注射呋塞米并去除环境中的钠 24 小时后交替进行。这是一个初步实验，因为据我们所知，尚无关于 MK-801 对盐味觉影响的描述。在另一组大鼠中，我们探究将 MK-801 与快速发作的钠食欲发作期（“Furo/Cap”）配对，是否会在 “配对后试验” 中影响血管紧张素 II 依赖性的钠摄入敏化，并伴随着味觉测试的变化。我们首先假设，如之前所示，MK-801 对钠摄入敏化的抑制作用与配对后味觉试验中 0.3M NaCl 适口性的降低有关。在配对后试验前，将 MK-801 或其对照剂与 Furo/Cap 配对三次，配对后试验在最后一次配对三天后进行。然后，我们假设与 Furo 和 Cap 的对照剂配对的 MK-801 历史，会改变在配对后味觉试验中，大鼠对后来由 Furo/Cap 引起的 0.3M NaCl 的口面部反应。这是一个对照实验，用于研究 MK-801 是否会改变对 Furo/Cap 无经验的大鼠在快速发作钠食欲期间对 0.3M NaCl 的口面部反应。最后，我们探究 MK-801 对钠食欲的影响是否是对摄食行为普遍抑制作用的结果。为此，我们研究 MK-801 是否会影响对 MK-801 无经验且禁食的大鼠的食物摄入量。

实验动物：雄性霍尔茨曼年轻成年（3 个月大）大鼠，体重在 290 至 320 克之间，取自巴西圣保罗州立大学阿拉拉夸拉分校的动物群落。这些大鼠饲养在 12 小时光照 / 12 小时黑暗的周期中，单独饲养在温度和湿度可控房间的铁丝网悬挂笼子里。每天对它们进行轻柔处理。每个笼子里有两个 100 毫升容量的聚丙烯瓶，瓶子有刻度，精确到毫升，带有不锈钢喷嘴，分别装有水和 0.3M NaCl，除非另有说明，这些瓶子可自由取用。

实验 1：MK-801 在应对缓慢发作钠食欲时的 “味觉测试” 和 “摄入测试”：在味觉测试中，与腹腔注射对照剂相比，腹腔注射 MK-801 在第 0 阶段对口腔内输注 0.3M NaCl 的享乐性反应数量没有产生改变。在大鼠能够获取并摄入 0.3M NaCl 45 分钟后，对照剂组和 MK-801 组的享乐性反应数量均下降。存在时间效应（p < 0.05）[F (1,10)=30.2]。不存在处理效应（p > 0.05）[F (1,10)=2.5]，时间与处理之间也不存在交互作用。

讨论：MK-801 在两种使用利尿 / 利钠药诱导钠食欲的方案中均抑制了 0.3M NaCl 的摄入。缓慢发作方案，即呋塞米和去除环境钠 24 小时的组合，由血管紧张素 II 介导，但潜伏期超过 12 小时（实验 1）。快速发作方案，需要注射 Furo/Cap 以快速将循环中的血管紧张素 I 大量转化为大脑中的血管紧张素 II，潜伏期缩短至 1 小时（实验 2）。

作者贡献声明：Aline A. Zenatti：写作 - 评审与编辑、方法学、数据整理、概念化。Emilson D. Pereira：写作 - 评审与编辑、方法学、数据整理。Patrícia M. de Paula：写作 - 评审与编辑。José V. Menani：写作 - 评审与编辑。Carina A.F. Andrade：写作 - 评审与编辑、概念化。Laurival A. De Luca Jr.：写作 - 评审与编辑、原始草案撰写、项目管理、概念化。

伦理声明：1. 所述工作此前未以预印本、摘要、已发表讲座、学术论文或注册报告以外的形式发表过。2. 本文未在其他地方考虑发表。3. 本文的发表得到所有作者的认可，并得到开展该工作所在机构的负责当局的默许或明确批准。4. 如果被接受，本文不会以相同形式在其他地方发表，无论是英文还是其他语言，包括。

利益冲突声明：“我没有任何需要声明的利益冲突”。

致谢：部分工作在 2020 年 1 月 29 日至 31 日于巴西戈亚尼亚举行的第 24 届巴西心血管生理学研讨会，以及 2022 年 7 月 12 日至 16 日于葡萄牙波尔图举行的摄食行为研究学会（SSIB）第 29 届年会上展示。作者感谢 Carla D.M.D. de Souza 提供的出色秘书协助。巴西国家研究委员会（CNPq 资助 AA Zenatti 的 141105/2021 - 6 号项目、ED Pereira Jr. 的 164858/2018 - 0 号项目以及 LA De Luca Jr. 的 306833/2021 - 2 号项目）。