新型 LAMP-MS 检测法：疟疾诊断的高效新方案

为解决传统疟疾诊断局限，研究人员开发 LAMP-MS 检测法，该方法灵敏、特异，适用于资源受限地区。

　　疟疾，一个在热带和亚热带地区肆虐的 “健康杀手”，每年都有数以亿计的人被它感染，夺走数十万人的生命，尤其是非洲撒哈拉以南地区的儿童，深受其害。传统的疟疾诊断方法，比如显微镜检查和基于聚合酶链反应（PCR）的检测，虽然可靠，但在资源匮乏的地区却很难施展拳脚。因为显微镜检查需要专业的技术人员和一定的实验室条件，而 PCR 检测则依赖复杂的设备和专业人员操作，这些地区往往不具备这些条件。因此，开发一种快速、准确且适用于资源受限地区的疟疾诊断方法迫在眉睫。

韩国大学医学院研究人员开展了一项研究，开发出一种结合 Chelex-100 / 煮沸 DNA 提取法与环介导等温扩增 - 微扫描仪（LAMP-MS）检测的疟疾诊断平台，并将研究成果发表在《Scientific Reports》上。这一成果意义重大，有望为疟疾防控带来新的转机。

研究人员主要采用了以下关键技术方法：一是样本采集，收集了 2013 年至 2022 年韩国大学九老医院疑似疟疾感染患者的残留血液样本；二是 DNA 提取，使用 Qiagen QIAamp DNA Blood Mini Kit 和定制的 Chelex-100 / 煮沸核酸提取法；三是检测分析，运用 LAMP-MS 检测、定量实时 PCR 等技术，并对相关数据进行统计分析。

下面来看具体的研究结果：

1. Chelex-100 / 煮沸法的优化：通过实验确定从血液样本中提取 DNA 的最佳条件，血液浓度为 2.5%、Chelex-100 树脂溶液浓度为 10% 时，该方法效果最佳。
2. LAMP-MS 检测法的开发：开发出的 Pan/Pf/Pv/IC LAMP-MS 检测法与多重疟疾 Pan/Pf/Pv/IC LAMP 检测法相比，结果一致，且能通过便携式显微镜直接观察到核酸扩增情况，可靠性高。
3. 检测限评估：使用恶性疟原虫（Pf）和间日疟原虫（Pv）临床样本评估 LAMP-MS 检测法的检测限（LoD）。结果显示，Pf 的 LoD 为 1.1×102 寄生虫 /μL，Pv 的 LoD 为 2×102 寄生虫 /μL。虽然 qPCR 检测法灵敏度略高，但 LAMP-MS 检测法比快速诊断测试（RDT）更灵敏。
4. 临床性能评估：用 260 份临床样本评估 LAMP-MS 检测法的临床性能。对于 Pf 样本，Pan 靶标的灵敏度为 97.5%，Pf 特异性靶标的灵敏度为 100%；对于 Pv 样本，Pan 靶标的灵敏度为 95%，Pv 特异性靶标的灵敏度为 94%；对于非感染样本，该检测法特异性达 100%。这些结果与商业 RealStar 疟疾筛查和分型 PCR 试剂盒相当。
5. 交叉反应测试：用感染其他病毒的样本测试 LAMP-MS 检测法的交叉反应性，结果显示该检测法与寨卡病毒、基孔肯雅病毒、日本脑炎病毒和登革热病毒等均无交叉反应，特异性良好。

研究结论和讨论部分指出，LAMP-MS 检测法优势明显。它能在 30 分钟内得出结果，检测成本低，样本制备简单，总体诊断过程经济高效。其微芯片设计可实现多重检测，通过增加芯片 chambers 数量，还能检测更多病原体。不过，该检测法也存在一些局限性，比如样本加载时可能发生交叉污染，操作步骤较多易出现人为误差。未来可开发全封闭的墨盒系统来解决这些问题。此外，还需进一步在实地条件下验证其可行性，评估对干血斑和毛细血管血样本的适用性，提高对 Pv 的检测灵敏度并纳入更多疟疾种类，以进一步提升其诊断能力。

总的来说，这项研究开发的 LAMP-MS 检测法为疟疾诊断提供了新的选择，尤其在资源受限地区具有重要的应用价值，对疟疾的有效管理和根除意义非凡。