OTA 延迟复制叉进展:研究人员利用 DNA 纤维分析技术,发现 OTA 处理 HK - 2 细胞后,复制叉速度显著降低。同时,EdU 掺入实验也表明,OTA 处理的细胞在 S 期,EdU 掺入 DNA 的量明显减少,这意味着 OTA 实实在在地干扰了 DNA 复制过程。
γH2AX 诱导与 DNA 复制相关:研究发现,OTA 处理 HK - 2 细胞后,γH2AX 水平显著上升,而且这种上升与 DNA 复制紧密相关。免疫荧光分析显示,γH2AX 主要出现在 S 期有 DNA 合成的细胞中,延伸染色质纤维分析也观察到在新复制的染色质纤维上 γH2AX 增加。
S 期 OTA 诱导的 DNA 损伤持续到有丝分裂:研究人员发现,经 OTA 处理的细胞在 S 期产生的 DNA 损伤,在进入有丝分裂后并未完全修复。在 G1期细胞中,γH2AX 和 53BP1 的水平呈现浓度依赖性增加,这表明 DNA 损伤持续存在,并传递到了下一个细胞周期。
细胞对复制应激的反应:在正常情况下,复制应激会激活 DNA 损伤反应(DDR)通路,以延迟细胞周期,修复 DNA 损伤。但研究发现,OTA 处理的细胞中,ATR - Chk1 通路没有被激活,ATM - Chk2 通路仅有轻微激活,这使得细胞可能带着受损或未完全复制的 DNA 进入有丝分裂,从而影响染色体的正常分离。
DNA - PKcs 在 γH2AX 诱导中的作用:通过使用激酶抑制剂进行实验,研究人员发现 DNA - PKcs 在 OTA 诱导 γH2AX 的过程中发挥了重要作用。抑制 DNA - PKcs 后,γH2AX 的信号强度明显降低。
综合研究结论和讨论部分,这项研究首次为 OTA 干扰 DNA 复制提供了实验证据,表明复制应激是 OTA 基因毒性的早期关键事件。这一发现意义重大,它为解释 OTA 诱导的有丝分裂异常和遗传损伤提供了新的视角,让人们更深入地理解了 OTA 致癌的机制。同时,也为未来进一步研究 OTA 的毒性机制指明了方向,有助于完善对这种重要食品污染物的风险评估,从而更好地保障人类健康。