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为探究抗生素混合剂(ABM)能否清除热带假丝酵母内细菌,研究发现 ABM 无法破坏真菌液泡内细菌定植。
在热带假丝酵母(
Candida tropicalis)内部检测到幽门螺杆菌(
Helicobacter pylori)、葡萄球菌(
Staphylococcus)、诺卡氏菌(
Nocardia)和蓝细菌(
Cyanobacteria),这引发了一个问题:用抗生素混合剂(ABM,包含阿莫西林、环丙沙星、利福平、甲硝唑)处理酵母,能否清除其细胞内的细菌呢?活 / 死染色结果显示,热带假丝酵母的液泡内存在有活力的细菌。从酵母 DNA 中扩增出的细菌 16S rRNA 基因片段大小分别为 521bp、750bp、606bp 和 450bp,这与对照的幽门螺杆菌、葡萄球菌、诺卡氏菌和蓝细菌的基因片段大小相似。
为了清除细胞内细菌,研究人员将热带假丝酵母培养在酵母 - 葡萄糖(YG)肉汤中,并用浓度为 32 - 1024μg/mL 的 ABM 处理长达 24 小时。之后,通过菌落计数、活 / 死染色以及检测细菌 16S rRNA 基因来评估处理后的酵母细胞及其细胞内细菌的活力。结果发现,暴露于 32 - 256μg/mL ABM 的热带假丝酵母菌落数(4.39 - 9.63),以及暴露于 512 - 1024μg/mL ABM 的热带假丝酵母菌落数(9.67 - 9.77),都与各自的对照组相似(p>0.05) 。处理后的酵母和对照组酵母中扩增出相似的细菌基因,这证实了细胞内细菌持续存在。
用 32 - 256μg/mL ABM 处理的酵母显微照片显示,酵母和细胞内细菌都完好无损;然而,用 512μg/mL 和 1024μg/mL ABM 处理的酵母,分别出现了少于 10% 和多于 10% 的黄色受损酵母,这些酵母积累了黄色的利福平。荧光显微镜观察发现,无论是完好的还是受损的酵母,其液泡内都携带有活细菌。将处理后的酵母在 YG 琼脂上培养,产生的菌落中酵母和细胞内细菌都是完好的。原来,酵母会排出抗生素,降低了抗生素杀死细胞内细菌的有效浓度。所以,抗生素无法破坏真菌液泡内细菌的定植。