Ghrelin 与骨肉瘤的 “隐秘联系”：新发现为抗癌治疗点亮希望

研究人员为探究骨肉瘤（OS）发病机制，研究 Ghrelin 对其影响，发现它促进肿瘤发展及顺铂耐药，或为治疗靶点。

　　在医学领域，骨肉瘤（Osteosarcoma，OS）是一种极为棘手的疾病，它是最常见的原发性骨恶性肿瘤，就像潜伏在身体里的 “恶魔”，有着极高的转移倾向，严重威胁着患者的生命健康。目前，骨肉瘤患者的 5 年生存率低于 25%，单纯手术治疗只能挽救约 15 - 17% 的患者，对于那些无法手术切除或复发的患者而言，预后情况更是不容乐观。为了打破这一困境，寻找新的治疗方法迫在眉睫。

在这样的背景下，山东大学齐鲁医院等机构的研究人员开展了一项关于 Ghrelin 与骨肉瘤关系的研究，相关成果发表在《Journal of Orthopaedic Surgery and Research》上。

研究人员采用了多种技术方法来开展研究。他们收集了山东大学齐鲁医院 74 例骨肉瘤患者的组织样本；通过细胞培养技术，对人 K-HOS 和 MG-63 细胞系进行培养；利用动物实验，在裸鼠身上进行皮下接种和原位接种实验；还运用了 RNA 提取与实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）分析、免疫组化、细胞活力和增殖实验、细胞迁移和侵袭实验等多种实验技术。

研究结果如下：

1. Ghrelin 高表达与患者预后不良相关：研究人员通过免疫组化检测了 74 例骨肉瘤患者组织样本中 Ghrelin 的表达水平，并对患者进行无转移生存期分析。结果发现，Ghrelin 高表达的患者生存率较低，且在裸鼠的肿瘤组织和肺转移组织中，Ghrelin 的表达也更高。这表明 Ghrelin 高表达可能促进骨肉瘤的进展和侵袭，导致不良的临床结局。
2. Ghrelin 促进骨肉瘤细胞增殖和迁移能力：基于对 K-HOS 和 MG-63 细胞的 RNA-Seq 数据分析，发现 Ghrelin 能增加促癌因子的表达，抑制抑癌因子的表达。Cell Counting Kit-8（CCK8）实验和集落形成实验表明，Ghrelin 能显著促进细胞增殖，且在 200ng/ml 时促增殖效果明显，但在 400ng/ml 和 800ng/ml 时效果减弱。Transwell 实验和划痕实验显示，Ghrelin 能显著增加 K-HOS 和 MG-63 细胞的迁移和侵袭能力，且这种作用具有浓度依赖性。
3. Ghrelin 促进肿瘤在小鼠模型中的发展：在原位和异种移植小鼠模型中，研究人员发现沉默 Ghrelin 能显著抑制肿瘤形成，而过表达 Ghrelin 则能快速促进肿瘤形成。H&E 染色显示，Ghrelin 过表达组细胞增殖增加，沉默组则减少。免疫组化染色检测 caspase 3 表达发现，Ghrelin 过表达组肿瘤细胞中 caspase 3 阳性细胞比例显著低于对照组，而沉默组则更高。这表明 Ghrelin 能促进肿瘤在小鼠模型中的发展。
4. Ghrelin 通过 AKT 和 Wnt/β-catenin 通路促进骨肉瘤细胞增殖：通过 Western blot 分析发现，添加 Ghrelin 后，K-HOS 和 MG-63 细胞中 AKT 通路显著激活，且随着 Ghrelin 浓度增加，Runx-2 和 β-catenin 的表达也增加，而添加 β-catenin 抑制剂则抑制了它们的表达。这揭示了 Ghrelin 可能通过激活 AKT 和 Wnt/β-catenin 通路促进骨肉瘤细胞增殖。
5. Ghrelin 增加顺铂耐药性：顺铂是治疗骨肉瘤的常用药物，但耐药问题严重。研究发现，顺铂可降低 K-HOS 和 MG-63 细胞中 Ghrelin 的表达，而添加 Ghrelin 则显著抑制顺铂对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。TUNEL 实验表明，顺铂增加细胞凋亡，而 Ghrelin 则逆转这一作用。JC-1 染色显示，Ghrelin 可抑制顺铂诱导的线粒体损伤，且 Ghrelin 能促进多药耐药蛋白 1（MDR-1）的表达。这说明 Ghrelin 可通过减少线粒体损伤和过表达 MDR-1 增加顺铂耐药性。

研究结论和讨论部分指出，本研究发现 Ghrelin/AKT/Wnt/β-catenin 参与了骨肉瘤的发展过程。Ghrelin 高表达与患者预后不良相关，它不仅加重了骨肉瘤的恶性程度，增加了 AKT 和 MAPK 的磷酸化水平，还增强了顺铂耐药性。虽然 Ghrelin 在不同癌症中的作用存在差异，但其在骨肉瘤细胞的迁移、侵袭和增殖中起着关键作用，且其促进骨肉瘤细胞增殖是通过 AKT 和 Wnt/β-catenin 通路实现的。此外，Ghrelin 在耐药性方面的作用也为后续研究提供了方向。总体而言，该研究表明调节 Ghrelin 水平可能是治疗骨肉瘤的一种新的治疗方法，为骨肉瘤的治疗带来了新的希望，为后续的临床研究和治疗策略的制定提供了重要的理论依据 。