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为探究 CD39 在胆管癌中的作用，研究人员经多实验研究发现其可促癌进展，是潜在预后因子和治疗靶点。
胆管癌（Cholangiocarcinoma，CCA）是常见的胆道恶性肿瘤，近年来全球发病率呈上升趋势，死亡率居高不下。目前，手术切除是唯一可能治愈胆管癌的方法，但早期胆管癌症状隐匿，多数患者确诊时已错过手术时机，仅 30% - 40% 的患者适合手术，且术后复发率高，5 年总生存率（Overall Survival，OS）低于 40%。对于晚期胆管癌，以 CisGem 为主的一线标准治疗方案，因患者对化疗耐药，无进展生存期（Progression-Free Survival，PFS）和总生存期分别仅为 8.0 - 11.7 个月。虽然靶向治疗和免疫治疗的出现为胆管癌治疗带来了新希望，如 IDH-1 抑制剂 ivosidenib 对特定晚期胆管癌患者有效，pembrolizumab 适用于特定分子特征的胆管癌患者，但胆管癌治疗仍面临两大难题：缺乏特异性生物标志物和有效治疗靶点。因此，深入探究胆管癌发病机制，寻找新的治疗靶点迫在眉睫。
复旦大学附属中山医院的研究人员开展了关于 CD39 在胆管癌中生物学功能及潜在机制的研究，相关成果发表于《Clinical Cancer Bulletin》。该研究发现，CD39 在胆管癌中异常表达，是影响患者预后的独立危险因素，可促进胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭，有望成为胆管癌潜在的预后生物标志物和治疗靶点。
研究人员为开展此项研究，采用了多种关键技术方法。首先，收集了复旦大学附属中山医院的 12 对新鲜胆管癌组织及癌旁组织，还有 180 例胆管癌患者样本用于后续实验。通过定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹法（Western blot，WB）和免疫组化染色来检测 CD39 的表达水平；利用 RNA 干扰技术构建稳定敲低和过表达细胞系；运用细胞计数试剂盒 - 8（Cell Counting Kit-8，CCK-8）实验评估细胞增殖能力，Transwell 实验检测细胞迁移和侵袭能力；构建细胞系来源的异种移植（Cell-line-derived xenograft，CDX）模型进行体内实验；采用免疫共沉淀技术鉴定与 CD39 结合的蛋白。
研究结果主要如下：
- CD39 表达异常与胆管癌预后不良相关：研究人员通过对多组胆管癌组织样本进行 RNA 测序、RT-qPCR 和 WB 检测，发现 CD39 在肿瘤组织和有淋巴结转移的肿瘤中显著上调。免疫组化检测 180 例胆管癌患者组织后发现，CD39 在肿瘤组织中高表达，且与淋巴结转移和晚期 TNM 分期相关。生存分析显示，CD39 高表达的患者总生存期较差，多因素分析表明 CD39 是胆管癌患者独立的预后因素。
- CD39 促进胆管癌细胞增殖和转移：研究人员检测不同胆管癌细胞系中 CD39 的表达，选取表达差异明显的 RBE 和 TFK-1 细胞系进行实验。构建稳定敲低和过表达细胞系后，CCK-8 实验表明，敲低 CD39 抑制细胞增殖，过表达则促进增殖。Transwell 实验显示，敲低 CD39 抑制 TFK-1 细胞迁移和侵袭，过表达促进 RBE 细胞迁移和侵袭。体内实验也证实，过表达 CD39 增加肿瘤体积、重量和肝转移结节数量，敲低则相反。
- CD39 与 ANXA2 结合并增强其磷酸化：为探究 CD39 作用机制，研究人员进行免疫沉淀和质谱分析，筛选出 9 种可能与 CD39 相互作用的蛋白，WB 实验证实 Annexin A2（ANXA2）与 CD39 特异性结合。敲低 CD39 可抑制 ANXA2 在 Tyr24 位点的磷酸化，且 CD39 表达不影响 ANXA2 表达水平。
- CD39 影响 PI3K/AKT 通路和 EMT 过程：RNA 测序分析发现，高表达 CD39 的患者中，PI3K/AKT 通路和上皮 - 间质转化（EMT）过程受显著影响。WB 实验进一步证实，敲低 CD39 抑制 PI3K/AKT 通路激活和 EMT 过程相关蛋白表达，过表达则促进这些过程。
- CD39 通过调节 ANXA2 磷酸化发挥生物学功能：研究人员进行点突变实验改变 ANXA2 的 Tyr24 位点，CCK-8、Transwell 和 WB 实验结果显示，点突变可逆转 CD39 过表达对细胞增殖、迁移、侵袭以及 EMT 过程和 PI3K/AKT 通路的促进作用，证实 CD39 通过调节 ANXA2 磷酸化发挥生物学功能。
综上所述，该研究表明 CD39 在胆管癌组织中异常高表达，可通过与 ANXA2 结合，促进 ANXA2 在 Tyr24 位点的磷酸化，激活 PI3K/AKT 通路，影响 EMT 过程，进而促进胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。CD39 有望成为胆管癌潜在的预后生物标志物和治疗靶点，为胆管癌的诊断和治疗提供了新的方向。不过，该研究也存在一定局限性，如为回顾性研究，样本量较小，CD39/ANXA2 轴影响胆管癌进展的具体机制还需进一步探究。未来还需要更多前瞻性、多中心研究加以验证，从而推动胆管癌治疗的新突破。
