非病毒内含子敲入技术：开拓人类 T 细胞基因编辑新境界

为解决人类 T 细胞 DNA 序列整合难题，研究人员开展相关研究，发现非病毒内含子敲入技术优势，意义重大。

　　目前，将 DNA 序列精确整合到人类 T 细胞基因组的方法主要靶向外显子区域，这限制了整合位点的选择，还需要复杂的细胞选择策略。而研究表明，非病毒内含子敲入（将合成外显子整合到内源性内含子中）能够在成功编辑的细胞中实现高效的基因靶向和选择性基因敲除。在原代人类 T 细胞中，将嵌合抗原受体（CAR）敲入 T 细胞受体 α 恒定区（T-cell receptor alpha constant locus），通过对 T 细胞受体阴性细胞进行阴性筛选，可使超过 90% 的 CAR⁺T 细胞得到纯化。该方法具有可扩展性，适用于多个内含子位点，研究人员在 4 个不同的内源性表面受体基因的内含子中进行了验证。它还支持大的合成外显子（长度超过 5kb）的整合，这些外显子具有可保留内源性基因表达的可变剪接结构，并且能整合允许内源性或用户自定义基因调控的合成启动子。非病毒内含子敲入技术拓宽了可靶向基因组位点的范围，为筛选编辑后的原代人类 T 细胞提供了一种简化且高通量的策略。