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研究人员为解决黄夹克毒液过敏诊断难题，开展重组 Ves v 5 研究，证实其可替代天然提取物用于诊断。
在生活中，被昆虫叮咬是常有的事，但对一些人来说，黄蜂尤其是黄夹克的叮咬可能引发严重过敏反应，甚至危及生命。据统计，在欧洲，普通人群被膜翅目昆虫蜇伤后发生全身反应的概率为 0.3 - 7.5%，而昆虫蜇伤过敏的致死率每年可达 0.09 - 0.45/1,000,000 人。目前，诊断膜翅目昆虫毒液过敏主要依靠临床病史、皮肤点刺试验（SPT）和血清中特异性免疫球蛋白 E（IgE）检测。然而，天然毒液提取物的质量和数量参差不齐，其成分的变异性和不一致性使得诊断测试的可靠性大打折扣。因此，寻找一种更精准、稳定的诊断方法迫在眉睫。
为了解决这一难题，来自伊朗比尔詹德医科大学免疫学系、细胞与分子研究中心以及澳大利亚昆士兰科技大学的研究人员 Sara Mahmoudzadeh、Hadis Rezapour 等人开展了一项研究，相关成果发表在《BMC Immunology》上。他们旨在生产重组黄夹克毒液磷脂酶 A5（Ves v 5），并评估一组敏感患者对蜂毒的致敏模式。
在研究方法上，研究人员主要采用了以下关键技术：首先，从 7 名参与者（4 名对黄夹克毒液敏感，3 名不敏感）中采集血液样本并分离血清，用于评估对蜂毒和重组过敏原的易感性。接着，利用大肠杆菌（E. coli）表达系统生产重组 Ves v 5，通过在构建的载体中加入 N 端 pelB 前导序列，使目标蛋白分泌到大肠杆菌周质空间，以提高蛋白的可溶性。之后，运用亲和层析技术对重组蛋白进行纯化，通过镍离子亲和层析柱（IMAC），用不同浓度咪唑洗脱，获得纯化的 Ves v 5。最后，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹等技术，评估重组 Ves v 5 的功能和诊断相关性。
研究结果如下：
- 蛋白表达与纯化：成功在大肠杆菌中表达并纯化出可溶性 Ves v 5。通过 SDS - PAGE 检测，证实其分子量约为 25kDa，与预期相符。
- 敏感血清验证：使用商业免疫印迹试剂盒验证了收集的血清对蜜蜂和黄蜂过敏原的敏感性，确保了血清样本的可靠性。
- IgE 反应性分析：免疫印迹和 ELISA 试验表明，重组 Ves v 5 能与膜翅目毒液致敏患者血清中的 IgE 结合，且抑制 ELISA 显示，预先用重组 Ves v 5 处理的血清中 IgE 结合减少，虽然这种减少不具有剂量依赖性，但仍证实了重组 Ves v 5 的生物学活性。
研究结论与讨论部分指出，该研究评估了重组 Ves v 5 作为黄夹克毒液过敏诊断标志物的可行性，解决了天然毒液提取物存在的问题。重组 Ves v 5 可作为天然提取物的替代品，用于黄夹克毒液过敏的诊断和免疫治疗评估，这一成果与先前研究中重组过敏原在诊断方面的实用性相契合。不过，该研究也存在一定局限性，样本量较小影响了研究结果的普遍性，同时在优化蛋白质溶解性和纯化过程中存在技术挑战，可能影响过敏原的产量和功能。未来研究应通过大量试验评估重组 Ves v 5 的临床有效性，并探索其在个性化免疫治疗策略中的应用。此外，合成更多重组毒液过敏原，将有助于更全面地了解其在诊断和治疗中的作用。
总的来说，这项研究为黄夹克毒液过敏的诊断提供了新的方向和希望，重组 Ves v 5 有望成为一种更可靠、更标准化的诊断工具，尽管目前还存在一些问题，但也为后续研究指明了方向，推动该领域不断向前发展。
