PPP1R13L：宫颈癌治疗新靶点的关键发现

为探究 PPP1R13L 在宫颈癌中的作用机制，研究人员开展相关研究，发现其通过抑制 p63 介导的 PTEN 转录促进宫颈癌进展，为宫颈癌治疗提供新方向。

　　宫颈癌，这个隐匿在女性健康领域的 “杀手”，一直是全球公共卫生的重大挑战，尤其在中低收入国家，每年都有大量新增病例和死亡人数。人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染是宫颈癌发生的主要诱因之一，其中 HPV 的 E6 蛋白与 p53 蛋白的相互作用，导致 p53 蛋白降解，成为宫颈癌发病机制中的关键环节。在这样的背景下，探寻宫颈癌治疗的新靶点和新机制迫在眉睫。

武汉大学中南医院的研究人员肩负着攻克这一难题的使命，展开了深入研究。他们聚焦于 PPP1R13L（蛋白磷酸酶 1 调节亚基 13 样，也称为 p53 凋亡刺激蛋白抑制剂 iASPP）在宫颈癌中的作用机制，经过一系列严谨的实验和分析，得出了一系列重要结论，为宫颈癌的治疗带来了新的曙光。该研究成果发表在《Cellular and Molecular Life Sciences》杂志上。

研究人员在研究过程中，运用了多种关键技术方法。他们收集了武汉大学中南医院 40 例宫颈癌组织标本和 19 例正常宫颈组织标本，获取了相关 RNA 表达及临床数据，这些数据来源于 TCGA 的 CESC 数据集、GTEx 数据集和 GEO 数据库中的多个 GSE 数据集。通过基因集变异分析（GSVA）、Spearman 相关性分析等数据分析方法，挖掘数据背后的信息。在细胞实验方面，采用细胞培养和转染技术，培养 HeLa、SiHa、C33A 等细胞系，并进行相关基因的转染操作。利用细胞迁移实验、伤口愈合实验、糖酵解表型评估、细胞增殖和克隆形成实验等检测细胞功能变化。通过蛋白质免疫印迹（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、双荧光素酶报告基因检测、流式细胞术分析细胞周期、构建肿瘤异种移植模型和免疫组织化学染色、染色质免疫沉淀（ChIP）实验等技术，从不同层面深入探究 PPP1R13L 在宫颈癌中的作用机制。

下面来看具体的研究结果。

1. PPP1R13L 影响宫颈癌预后并与肿瘤进展通路相关：基于多个数据库数据，生存分析显示 PPP1R13L 高表达与宫颈癌患者预后不良相关。有淋巴结转移、HPV 阳性及 HPV16 持续感染的患者，PPP1R13L mRNA 表达更高。通过单样本基因集富集分析（ssGSEA）发现，PPP1R13L 表达与肿瘤增殖、G2/M 检查点、上皮 - 间质转化（EMT）、p53 通路、细胞对缺氧的反应以及 PI3K/AKT/mTOR 通路显著正相关。
2. PPP1R13L 促进宫颈癌细胞增殖、周期进展并促进 EMT：在宫颈癌细胞系 SiHa 和 HeLa 中，过表达 PPP1R13L 促进细胞增殖、迁移和 EMT，敲低则抑制这些过程。同时，PPP1R13L 敲低使 SiHa 细胞周期阻滞在 G0/G1 期，过表达则减少该期细胞比例，且影响细胞周期相关蛋白表达。
3. PPP1R13L 下调 PTEN 激活 PI3K/AKT/mTOR 通路并上调宫颈癌细胞糖酵解：敲低 PPP1R13L 抑制 SiHa 细胞乳酸生成和葡萄糖摄取，过表达则增强 HeLa 细胞的这些能力。PPP1R13L 敲低增加 PTEN 蛋白和 mRNA 水平，激活 PI3K/AKT/mTOR 通路及下游糖酵解酶；过表达则相反。PTEN 的变化可逆转 PPP1R13L 对宫颈癌细胞增殖、迁移、EMT、细胞周期和糖酵解的影响。在小鼠宫颈癌异种移植模型中，敲低 PPP1R13L 抑制肿瘤生长，且肿瘤组织中 Ki67 表达降低，PTEN 表达升高，EMT 标记物 Snail 和葡萄糖转运蛋白 1（GLUT1）表达减少。
4. PPP1R13L 抑制 p53 和 TAp63 对 PTEN 的转录活性：在 293T 细胞中，p53、TAp63 和 ΔNp63 增强 PTEN 启动子活性，PPP1R13L（FL）和 PPP1R13L（RAI）抑制其活性，且 PPP1R13L（RAI）抑制作用更强。在 HeLa 细胞中，由于 E6 蛋白持续降解 p53，p53 和 TAp63 对 PTEN 启动子活性相似。在 HPV 阴性且 p53 突变（R273C）的 C33A 细胞中，PPP1R13L 对 p53 的作用相反，但对 p63 的作用不变。梯度转染 E6 蛋白发现，E6 降解 p53，使 p63 在 PTEN 转录上活性增强，且 E6 与 PPP1R13L（RAI）有协同抑制作用。通过共免疫沉淀和 Western blot 证实 PPP1R13L 与 TAp63、ΔNp63 相互作用，ChIP 实验表明 PPP1R13L 减弱 p53 和 p63 与 PTEN 启动子的结合，过表达 p53 或 TAp63 可逆转 PPP1R13L 对 PTEN 的抑制作用。
5. PPP1R13L 抑制 p63 介导的 PTEN 转录，依赖特定反应元件：预测 PTEN 启动子上有两个 p53 和 p63 结合位点，构建缺失突变体和含结合序列的质粒进行双荧光素酶报告基因检测，确定 site1 是 p53、TAp63 和 ΔNp63 激活 PTEN 启动子的区域。对 site1 进行 C9A 突变，发现 PPP1R13L（RAI）对 TAp63 转录活性的抑制作用消失，证实 C9 是 PPP1R13L 选择性调节 TAp63 介导的 PTEN 转录的关键元件。研究还发现 PPP1R13L 和 p63 在宫颈癌组织中高表达，PTEN 在正常宫颈组织中高表达，在宫颈癌组织中低表达，且 PPP1R13L 和 PTEN 的表达与宫颈癌患者预后相关。

综合研究结论和讨论部分，PPP1R13L 通过抑制 PTEN 转录激活 AKT 通路，促进宫颈癌细胞增殖、EMT、细胞周期进展和糖酵解。在宫颈癌中，p53 持续降解、p63 高表达，使得 PPP1R13L/p63/PTEN 轴在宫颈癌进展中发挥重要且独特的作用。首次发现 p53 的 R273C 突变使 PPP1R13L 对其作用相反，且 PPP1R13L/p63 轴功能独立于 p53。同时，实验验证了 PPP1R13L 调节 p53 家族靶基因反应元件的序列基础。这些发现为宫颈癌的治疗提供了新的潜在靶点，为开发更有效的治疗策略奠定了理论基础，有望为宫颈癌患者带来新的希望。