HBV 相关肝癌新机制：lncRNA HDAC2-AS2 调控 CD8+ T 细胞助力精准治疗

为探究 HBV 相关肝癌进展机制，研究人员聚焦肿瘤细胞外 lncRNA，发现 HDAC2-AS2 抑制 CD8+ T 细胞，可作诊疗靶点。

　　肝癌，作为全球范围内常见且致命的恶性肿瘤，严重威胁着人类的生命健康。尤其是乙肝病毒（HBV）感染相关的肝癌，在东亚地区，特别是中国人群中高发。由于肝癌早期症状隐匿，多数患者确诊时已处于晚期，手术切除后复发率高，5 年生存率较低。肿瘤微环境在肝癌的发生、发展过程中起着关键作用，其中肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）是机体抗肿瘤免疫反应的重要参与者。然而，目前对于肿瘤细胞如何通过细胞外机制影响 TIL 功能，进而促进肝癌进展的具体机制仍知之甚少。

为了深入揭示这一谜题，中国科学院生物物理研究所的研究人员开展了一项极具意义的研究。他们的研究成果发表在《Nature Communications》上，为 HBV 相关肝癌的诊疗提供了新的方向和潜在靶点。

在这项研究中，研究人员主要运用了细胞实验、动物模型实验、分子生物学技术以及生物信息学分析等关键技术方法。细胞实验方面，使用多种肝癌细胞系和正常肝细胞系进行体外培养；动物模型实验则构建了裸鼠皮下移植瘤模型和免疫健全的 C57BL/6 小鼠原位肿瘤模型；分子生物学技术涵盖 RNA 提取、定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）、RNA 免疫沉淀（RIP）、蛋白质免疫印迹（Western blot）等；生物信息学分析则对癌症基因组图谱（TCGA）数据库等进行挖掘分析。此外，研究还使用了临床样本队列，收集患者的肿瘤组织和非肿瘤组织样本进行检测分析。

研究结果主要如下：

1. HDAC2-AS2 的表达调控及临床意义：TGF-β 信号通路在肝脏疾病进程中发挥着关键作用，研究人员发现 TGF-β1 在肝癌组织中的表达水平高于非癌肝组织。通过筛选 TGF-β 调控的长链非编码 RNA（lncRNA），发现 HDAC2-AS2（Ensembl ID: ENSG00000228624）在候选 lncRNA 中脱颖而出。TGF-β 能够上调 HDAC2-AS2 的表达，而抑制 TGF-β 信号通路（如使用 SB431542 抑制或敲除 Smad4）或阻断 HBV 感染可消除这种上调。进一步研究发现，HDAC2-AS2 在临床肝癌样本和 TCGA 数据库中的多种肿瘤组织（包括肝癌、胃癌、肾乳头状细胞癌和肾透明细胞癌）中均高表达，且其表达与 TGFB1 水平一致，与肝癌患者的不良生存预后相关。
2. HDAC2-AS2 对肿瘤生长的影响：研究人员发现 HDAC2-AS2 对肿瘤细胞自身的生长并无直接影响，但在免疫健全的 C57BL/6 小鼠模型中，过表达 HDAC2-AS2 可显著促进肿瘤生长。通过对肿瘤微环境中免疫细胞的分析发现，HDAC2-AS2 过表达导致肿瘤组织中细胞毒性 IFN-γ⁺和颗粒酶 B⁺ CD8⁺ T 细胞减少，而免疫抑制性调节性 T 细胞（Treg）、肿瘤相关巨噬细胞（TAM）和髓源性抑制细胞（MDSC）显著增加，使得肿瘤微环境更具免疫抑制性，从而促进肿瘤生长。
3. HDAC2-AS2 的细胞外运输机制：肿瘤细胞分泌的细胞外囊泡（EV）可在细胞间传递 RNA 和蛋白质，研究人员发现肝癌细胞分泌的 HDAC2-AS2 主要存在于 EV 中。通过多种实验方法证实，HDAC2-AS2 主要以 EV 依赖的方式分泌到细胞外，且 TGF-β 处理或 HBV 感染可增加 EV 中 HDAC2-AS2 的表达水平，同时发现肝癌患者血浆 EV 中的 HDAC2-AS2 水平显著高于健康人，表明其可作为肝癌诊断的新生物标志物。
4. HDAC2-AS2 对 CD8⁺ T 细胞功能的影响及机制：研究发现携带 HDAC2-AS2 的 EV 可被 CD8⁺ T 细胞摄取，进而影响其功能。过表达 HDAC2-AS2 会导致 CD8⁺ T 细胞凋亡增加、细胞毒性降低，而敲低 HDAC2-AS2 则可挽救 CD8⁺ T 细胞的凋亡和耗竭，增强其抗肿瘤反应。进一步探究机制发现，HDAC2-AS2 可与细胞周期蛋白依赖性激酶 9（CDK9）结合，导致 CDK9 降解，影响 CD8⁺ T 细胞的激活和分化。通过单细胞表观基因组分析和转录组分析发现，CDK9 与 CD8⁺ T 细胞的激活、细胞毒性密切相关，抑制 CDK9 会导致 CD8⁺ T 细胞凋亡、衰老和耗竭。
5. 免疫检查点阻断治疗的作用：考虑到 HDAC2-AS2 靶向 CDK9 导致 CD8⁺ T 细胞耗竭的现象，研究人员分析了免疫检查点阻断（ICB）治疗对肝癌患者 T 细胞反应的影响。结果发现，接受 ICB 治疗的患者中，CDK9⁺CD8⁺ T 细胞表达更高水平的 CDK9 和细胞毒性相关基因，且耗竭基因表达较低。在小鼠实验中，抗 PD-1 治疗显著抑制了 HDAC2-AS2 促进的肿瘤生长，表明 HDAC2-AS2-CDK9 轴介导的肿瘤进展对 ICB 治疗更为敏感，为肝癌免疫治疗提供了新的契机。

研究结论和讨论部分指出，本研究首次揭示了肿瘤来源的细胞外 lncRNA HDAC2-AS2 在 HBV 相关肝癌进展中的重要作用。HDAC2-AS2 通过抑制 CD8⁺ T 细胞的抗肿瘤功能，重塑肿瘤微环境，促进肿瘤生长和免疫逃逸。同时，HDAC2-AS2 可作为肝癌诊断的潜在生物标志物和治疗靶点，为肝癌的精准治疗提供了新的思路。此外，免疫检查点阻断治疗对 HDAC2-AS2-CDK9 轴介导的肿瘤进展具有显著疗效，提示联合治疗可能是肝癌治疗的更优策略。然而，目前仍有一些问题有待进一步研究，例如 HDAC2-AS2 与其他免疫调节因子之间的相互作用，以及如何更精准地靶向 HDAC2-AS2-CDK9 轴进行治疗等。

总之，这项研究为深入理解 HBV 相关肝癌的发病机制提供了新的视角，为肝癌的诊断和治疗开辟了新的方向，具有重要的理论意义和临床应用价值，有望为肝癌患者带来新的希望。